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自动进样—空间温度梯度CE检测单核苷酸多态性的研究

作　者: 李启
导　师: 徐章润
学　校: 东北大学
专　业: 分析化学
关键词: 空间温度梯度自动进样毛细管电泳单核苷酸多态性
分类号: R440
类　型: 硕士论文
年　份: 2009年
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内容摘要

基因突变和许多疾病的发生有密切的关系,如糖尿病、肿瘤、心脏病等,而单核苷酸多态性(Single nucleotide polymorphisms, SNPs)是基因突变中最常见的一种。温度梯度凝胶电泳(Temperature gradient gel electrophoresis, TGGE)可在同一温度梯度下,检测多个不同长度和不同突变的基因片段,是目前较为理想的SNPs检测方法之一。本文提出了一种简单可靠、控制方便的空间温度梯度形成方法,并结合缝管阵列进样技术,建立了一种快速、高效、高通量的自动化SNPs检测系统。第一章首先综述了SNPs电泳分析检测技术的发展现状,并对单链构象多态性的电泳分析、变性梯度凝胶电泳、构象敏感性凝胶电泳、TGGE和变性高效液相色谱等几种以构象为基础的SNPs分析检测技术进行了介绍。同时,对于TGGE温度梯度技术的研究现状也进行了相应介绍,包括时间温度梯度电泳和空间温度梯度电泳两种技术方法。最后还对微流控毛细管电泳(Capillary electrophoresis, CE)试样引入技术进行了介绍。第二章建立了一种自动进样-空间温度梯度毛细管电泳SNPs样品分析系统。将毛细管进样端作为试样电动引入探针,结合缝管阵列进样装置实现试样的自动引入、换样过程；利用石墨块加热器热辐射在毛细管内形成空间温度梯度,考察了其稳定性,6h内各测量点的温度变化RSD为0.12-0.21%(n=7)；利用长度仅为14 cm的Teflon AF涂覆石英毛细管同时作为电泳分离管道和荧光信号的波导管,对毛细管表面修饰、筛分介质的种类和浓度、缓冲溶液的pH值和浓度、电场强度等参数进行了优化；在同一温度梯度下,实现了对低温突变标准样品(209 bp)和大肠癌患者的临床标本K-ras基因突变样品的自动进样、换样和分离检测,试样间携出率为3.3%,其中对低温突变标准样品的单次分析时间为4 min,样品消耗量仅为5.6 nL。第三章对本文建立的自动进样-空间温度梯度毛细管电泳分析检测系统进行了总结和展望。

自动进样—空间温度梯度CE检测单核苷酸多态性的研究

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