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蜂毒素对SGC-7901细胞株增殖的影响及其部分作用机制研究

作　者: 吴宝明
导　师: 李俊
学　校: 安徽医科大学
专　业: 药理学
关键词: 蜂毒素细胞增殖细胞周期钙离子端粒酶
分类号: R285.5
类　型: 硕士论文
年　份: 2010年
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内容摘要

胃癌是全球最常见的恶性肿瘤之一,我国胃癌发病率与病死率占恶性肿瘤的首位。对于晚期转移性胃癌患者,寻找有效的化学药物是目前重要的研究课题。蜂毒(Bee venom)是工蜂通过螫针排出的毒汁,传统医学应用蜂毒治疗类风湿性关节炎、肿瘤、皮肤病等疾病。但存在成分复杂,毒副反应比较大等缺点。蜂毒素(Melittin)是蜂毒的主要成分,由26个氨基酸组成的多肽。本课题建立胃癌SGC-7901细胞株的体外模型,通过观察Melittin对SGC-7901细胞的增殖、周期、钙离子及端粒酶的影响,初步探讨Melittin的作用机制,为其开发为抗肿瘤的新药提供试验依据。主要研究内容如下：1.蜂毒素(Melittin)对SGC-7901细胞株增殖的影响1.1. Melittin对SGC-7901的形态学影响Melittin在药物浓度为1,2,4,8μg·ml-1剂量下体外给药,12 h后在倒置显微镜下观察细胞形态学的变化,并拍照。1.2.SRB法观察Melittin对SGC-7901增殖的影响采用罗丹明B(SRB)染色法观察Melittin对SGC-7901细胞株的敏感性及细胞生长曲线的影响,随着剂量的增大和时间的增加,Melittin对SGC-7901的抑制作用增强,细胞生长曲线降低,且与阳性对照药5-氟尿嘧啶比较,Melittin作用时间更快、作用强度更强。2. Melittin抗肿瘤作用机制的初步研究2.1. Melittin对SGC-7901细胞周期的影响流式细胞仪检测Melittin作用SGC-7901细胞24 h后,SGC-7901细胞周期的变化情况,当Melittin的浓度达到4μg·ml-1以上,细胞周期的G2/M期明显受到阻滞。与G2/M相关正调节基因Cdc25-CylinB1-CDK1的nRNA的表达水平均受到抑制。另外与细胞DNA合成密切相关的增殖细胞核抗原(PCNA)的mRNA表达也受到抑制。2.2. Melittin对SGC-7901细胞[Ca2+]i的影响通过激光共聚焦技术,观察Melittin对SGC-7901细胞Ca2+的影响,实验结果指示,Melittin能明显促进SGC-7901细胞外Ca2+内流,改变细胞内外的Ca2+稳态,从而造成细胞内钙超载,抑制细胞增殖。Melittin联用钙通道抑制剂后,抑制细胞增殖作用增强。2.3. Melittin对SGC-7901细胞端粒酶的影响端粒酶逆转录酶(TERT)作为端粒酶重要的催化亚单位,是端粒酶活性的主要调节部分.Western Blotting检测Melittin对SGC-7901端粒酶逆转录酶(TERT)的蛋白表达的影响,结果显示,在Melittin (4,8μg·ml-1)时,TERT蛋白表达明显减弱。

蜂毒素对SGC-7901细胞株增殖的影响及其部分作用机制研究

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