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灵芝孢子粉活性物质及指纹图谱研究

作　者: 俞晓玲
导　师: 黄宏南
学　校: 福建医科大学
专　业: 药物分析
关键词: 灵芝孢子粉灵芝多糖腺苷尿苷高效液相色谱法紫外分光光度法指纹图谱
分类号: R284.1
类　型: 硕士论文
年　份: 2010年
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内容摘要

灵芝具有多种营养成分并具有多种生理活性和药理作用[1],因此以灵芝孢子粉为原料开发系列功能性食品、保健品与日俱增[2],但至今为止灵芝孢子粉尚未有法定的质量标准,且对灵芝质量的研究多集中于灵芝多糖[3,4,5,6]和灵芝酸(三萜类)[7,8,9,10],而腺苷作为其主要的活性物质之一,对其研究较少[11,12]。本研究建立了灵芝孢子粉腺苷含量的测定方法,并对灵芝多糖的检测方法做了改进,以核苷类物质为参比物建立了灵芝孢子粉的高效液相色谱指纹图谱,指纹图谱可以体现灵芝孢子粉以核苷类为指标的整体特征,考察了批次之间的稳定性,为灵芝孢子粉提供了深层次评价质量的鉴别依据。一.灵芝孢子粉活性物质含量测定的研究目的:建立灵芝孢子粉中腺苷、灵芝多糖含量测定的分析方法,以此为灵芝孢子粉质量控制指标之一。方法:采用10%甲醇溶剂超声提取50min,以0.01mol/L乙酸钠溶液﹕甲醇=85﹕15(V/V)为流动相,UltimateTM AQ-C18(4.6×250mm,5μm)色谱柱,260nm检测波长,HPLC-PDA法测定腺苷的含量;采用紫外分光光度法,用硫酸–蒽酮显色法在625nm波长下测定吸光度值从而测定灵芝多糖的含量。结果:灵芝孢子粉中腺苷含量平均值为258.42μg/g,加标回收率在98.04%～99.64%之间;灵芝多糖含量平均值为1.75%,加标回收率在82.83%～90.00%之间,可以满足腺苷、灵芝多糖含量测定的分析要求。结论:本研究建立的方法适用于灵芝孢子粉中腺苷及灵芝多糖含量的测定,方法选择性强,操作简单快速。二.灵芝孢子粉高效液相色谱指纹图谱研究目的:以腺苷、尿苷等核苷类物质为参比物,建立灵芝孢子粉的高效液相色谱指纹图谱。方法:采用10%甲醇溶剂超声提取30min,以0.01mol/L乙酸钠溶液–甲醇为流动相梯度洗脱,UltimateTM(4.6×250mm,5μm)色谱柱,260nm检测波长,HPLC-PDA法测定。结果:S1～S9样品各色谱之间的相似度在0.925～0.947之间,均在0.900之上;S10样品的相似度为0.827,与0.900比较接近。结论:本研究参照核苷类的色谱条件,简化了梯度程序,建立了灵芝孢子粉的高效液相色谱指纹图谱鉴别方法,考察了十批次灵芝孢子粉的相似度,为其提供了更深层次评价质量的鉴别依据。

全文目录

摘要  6-8
Abstract  8-10
第一章实验仪器及材料  10-12
  1.1 实验仪器  10
  1.2 实验材料  10-11
  1.3 标准品  11-12
第二章灵芝孢子粉活性物质含量测定的研究  12-27
  2.1 引言  12-13
  2.2 高效液相色谱法测定灵芝孢子粉中腺苷的含量  13-21
    2.2.1 实验方法  13-14
      2.2.1.1 色谱条件  13
      2.2.1.2 对照品储备液的制备  13
      2.2.1.3 对照品溶液的制备  13-14
      2.2.1.4 供试品溶液的制备  14
      2.2.1.5 测定及计算  14
    2.2.2 实验条件选择与优化  14-18
      2.2.2.1 色谱条件的优化  14-16
        2.2.2.1.1 色谱柱的选择  14
        2.2.2.1.2 流动相的选择  14-15
        2.2.2.1.3 检测波长的选择  15-16
      2.2.2.2 供试品制备条件的选择  16-18
        2.2.2.2.1 提取溶剂的选择  16-17
        2.2.2.2.2 提取方法的比较  17-18
        2.2.2.2.3 超声时间的比较  18
    2.2.3 样品的色谱分离测定  18-19
    2.2.4 方法学的考察  19-21
      2.2.4.1 标准曲线的线性与检测限  19-20
      2.2.4.2 精密度试验  20
      2.2.4.3 稳定性试验  20
      2.2.4.4 重复性试验  20
      2.2.4.5 回收率试验  20-21
    2.2.5 小结  21
  2.3 紫外–可见分光光度法测定灵芝多糖的含量  21-24
    2.3.1 实验方法  21-22
      2.3.1.1 对照品溶液的制备  21-22
      2.3.1.2 标准曲线的绘制  22
      2.3.1.3 样品处理  22
      2.3.1.4 结果计算  22
    2.3.2 方法学的考察  22-24
      2.3.2.1 标准曲线的线性与检测限  22-23
      2.3.2.2 重复性试验  23
      2.3.2.3 稳定性试验  23
      2.3.2.4 回收率试验  23-24
    2.3.3 十批次灵芝孢子粉多糖含量的测定结果  24
    2.3.4 小结  24
  2.4 讨论  24-27
第三章灵芝孢子粉高效液相色谱指纹图谱研究  27-65
  3.1 引言  27-28
  3.2 灵芝孢子粉的指纹图谱研究  28-63
    3.2.1 实验方法  28-29
      3.2.1.1 色谱条件  28-29
      3.2.1.2 对照品溶液的制备  29
      3.2.1.3 供试品溶液的制备  29
      3.2.1.4 测定法  29
    3.2.2 实验条件选择与优化  29-44
      3.2.2.1 色谱条件的优化  29-40
        3.2.2.1.1 梯度洗脱优化程序的选择  29-33
        3.2.2.1.2 色谱柱的选择  33-34
        3.2.2.1.3 流动相的选择  34-36
        3.2.2.1.4 检测波长的选择  36-40
        3.2.2.1.5 流速的选择  40
        3.2.2.1.6 柱温的选择  40
      3.2.2.2 供试品制备条件的选择  40-44
        3.2.2.2.1 提取溶剂的选择  40-43
        3.2.2.2.2 提取方法的比较  43
        3.2.2.2.3 超声时间的比较  43-44
    3.2.3 高效液相色谱指纹图谱的建立  44-52
      3.2.3.1 指纹图谱的建立  44-46
      3.2.3.2 指纹图谱的分析和辨认  46-48
      3.2.3.4 相对保留值指纹图谱的确认  48-52
    3.2.4 色谱指纹图谱试验的方法学验证  52-61
      3.2.4.1 专属性  52
      3.2.4.2 精密度试验  52-54
      3.2.4.3 重复性试验  54-56
      3.2.4.4 重现性试验  56-58
      3.2.4.5 稳定性试验  58-61
    3.2.5 样品指纹图谱的相似度评价  61-63
      3.2.5.1 相似度评价的基本原理  61
      3.2.5.2 样品相似度测定  61-63
    3.2.6 指纹图谱分析小结  63
  3.3 讨论  63-65
第四章结论  65-67
参考文献  67-70
致谢  70-71
第五章综述  71-83
  （一）灵芝的化学成分及其质量控制研究进展  71-77
  （二）中药指纹图谱的应用及最新进展  77-83
参考文献  83-88
攻读硕士学位期间发表的文章  88

灵芝孢子粉活性物质及指纹图谱研究

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