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HIF-1α小干扰RNA对骨髓间充质干细胞HIF-1α、SDF-1α和VEGF基因表达的影响

作　者: 张文文
导　师: 林明
学　校: 福建医科大学
专　业: 内科学
关键词: 缺氧诱导因子-1α 骨髓间充质干细胞 RNA干扰 缺氧 RNA干扰 基质细胞衍生因子-1α 血管内皮生长因子
分类号: R329
类　型: 硕士论文
年　份: 2010年
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内容摘要


第一部分MSCs的培养及HIF-1αsiRNA的筛选目的:贴壁法培养骨髓间充质干细胞(MSCs,mesenchymal stem cells), RT-PCR法筛选抑制效果最强的RNA干扰 的学位论文">RNA干扰序列。方法:贴壁法培养MSCs,取第3-5代细胞用于实验,倒置显微镜下观察细胞形态,并用流式细胞仪检测其表面标志物CD11b/c、CD34、CD44、CD90。将MSCs分为五组,单纯缺氧组(未经任何干预)、脂质体组(转染空载的脂质体)、siRNA609组(转染siRNA609)、siRNA658组(转染siRNA658)、siRNA2070组(转染siRNA2070)。将以上五组细胞在缺氧条件下培养24h,RT-PCR检测其HIF-1α的基因表达。结果:1.流式细胞仪检测CD11b/c阴性、CD34阴性、CD44阳性、CD90阳性细胞分别为84.2%±0.2%、97.91%±0.7%、99.8%±0.9%、97.7%±0.4%,CD44+/CD34-细胞数为99.4%±0.4%。2.转染siRNA细胞内均能检测到绿色荧光信号,lipsome组和空白对照组未见到绿色荧光信号。3.RT-PCR结果显示,与单纯缺氧组相比siRNA609、siRNA658、siRNA2070组HIF-1α的基因表达明显降低(P <0.05),其中siRNA658组抑制效果最强(P <0.05)。结论:1.培养的细胞表达MSCs相应的表面标记物。2.MSCs可以转染HIF-1αsiRNA序列。3. siRNA658干扰序列抑制效果最强。第二部分HIF-1α小干扰RNA对MSCs的HIF-1α、SDF-1α和VEGF基因表达的影响目的:HIF-1α小干扰RNA对MSCs HIF-1α、基质细胞衍生因子-1α(SDF-1α,stromal derived factor 1α)和血管内皮生长因子(VEGF,Vascular endothelial growth factor)基因表达的影响。方法:将MSCs四组,常氧对照组(无干预因素)、缺氧组(缺氧24h)、脂质体对照组(转染空载脂质体后缺氧24h)、RNA干扰组(转染脂质体介导的RNA干扰序列后缺氧24h)。RT-PCR法检测MSCs的HIF-1α、SDF-1α和VEGF mRNA表达水平, ELISA检测MSCs培养上清HIF-1α、SDF-1α和VEGF蛋白表达水平,CCK8检测MSCs培养上清对大鼠平滑肌细胞增殖的影响。结果:1.RT-PCR显示,同常氧对照组相比缺氧组HIF-1α、SDF-1α、VEGF基因表达增高(P <0.05),同脂质体对照组相比RNA干扰组HIF-1α、SDF-1α、VEGF基因表达降低。2.ELISA检测发现,同常氧对照组相比缺氧组条件培养液中的HIF-1α、SDF-1α、VEGF含量增加(P <0.05),同脂质体对照组相比RNA干扰组HIF-1α、SDF-1α、VEGF含量降低(p<0.05)。3.CCK8检测发现,同常氧对照组的相比缺氧组条件培养上清可以刺激平滑肌细胞增殖(P <0.05),同脂质体对照组相比RNA干扰组缺氧培养上清促进增殖的能力减弱(P <0.05)。结论:1.抑制HIF-1α表达可以使MSCs的SDF-1α和VEGF基因表达降低。2.缺氧可以使HIF-1α,SDF-1α和VEGF基因表达增高。3.HIF-1α是MSC调控SDF-1α和VEGF基因表达的主要因素之一。4.RNA干扰可以降低缺氧培养上清对大鼠平滑肌细胞的促增殖作用。

全文目录


1、英文缩略表  4-5
2、论文摘要（中文）  5-7
3、论文摘要（英文）  7-9
4、前言  9-11
5、第一部分 HIF-1α siRNA 的筛选以及骨髓间充质干细胞的培养  11-25
  材料与方法  11-18
  结果  18-22
  讨论  22-25
6、第二部分 HIF-1α小干扰 RNA 对骨髓间充质干细胞 HIF-1α、SDF-1α和 VEGF 基因表达的影响  25-38
  材料与方法  25-31
  结果  31-35
  讨论  35-37
  结论  37-38
7、参考文献  38-41
8、致谢  41-42
9、综述  42-50

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中图分类: > 医药、卫生 > 基础医学 > 人体形态学 > 人体组织学
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