学位论文 > 优秀研究生学位论文题录展示

金黄色葡萄球菌肠毒素B适配子的筛选及初步应用

作　者: 甘龙杰
导　师: 兰小鹏
学　校: 福建医科大学
专　业: 临床检验诊断学
关键词: 指数富集配体系统进化金黄色葡萄球菌肠毒素B 适配子不对称PCR 生物素一链霉亲和素系统
分类号: R378
类　型: 硕士论文
年　份: 2010年
下　载: 151次
引　用: 0次
阅　读: 论文下载

内容摘要

【目的】以金黄色葡萄球菌肠毒素B为靶物质筛选获得的富集单链DNA文库为起始文库,从中筛选获得能高亲和力和高特异性结合金黄色葡萄球菌肠毒素B的单个DNA适配子,并利用适配子建立的夹心法检测患者血清标本中SEB的含量,辅助诊断金黄色葡萄球菌感染;同时研究适配子在大鼠体内对SEB超抗原活性的抑制作用。【方法】1.将富集文库的筛选产物分别进行扩增、纯化、胶回收和TA克隆转化至大肠杆菌DH5α中,LB液体增菌保存。挑取单个菌落培养,作为菌种保存,抽提质粒,利用相应引物进行PCR扩增,并以羧基磁珠作为分离介质获得单个适配子。2.分别利用地高辛、荧光素和生物素标记的适配子直接测试法,对适配子的结合率和特异性等性质进行鉴定。3.分别采用抗体一适配子夹心法和文库一适配子夹心法,用于SEB的定量检测;同时对两种检测方法进行比对。利用文库一适配子夹心法检测临床患者血清中SEB的含量。4.将大鼠随机分成4组,分别进行不同的干预和处理;随后检测各组大鼠血清中IL-4, IL-6, ALT, AST,肌酐和尿酸的含量,并对各组检测结果进行分析。【结果】1.筛选产物进行克隆和增菌培养后,选择其中40个克隆子进行了检测,共获得了30个条带位置正确的适配子,并从中筛选得到了一条结合力和特异性均较好的适配子。2.文库一适配子夹心法和抗体一适配子夹心法均可用于SEB的检测,且两种检测方法的结果无统计学差异。而健康对照组与细菌感染组血清标本中SEB的含量具有统计学差异。3.适配子在大鼠体内对SEB超抗原活性具有一定的抑制作用,可有效抑制IL-4和IL-6的分泌,并能降低血清中AST, ALT,尿酸和肌酐的含量。【结论】本实验成功筛选到了针对SEB的高亲和力和高特异性的ssDNA适配子,建立了文库一适配子夹心法可以对血清标本中SEB的含量进行检测。适配子的作用类似于抗体,能够与SEB特异性的结合,它可以作为金黄色葡萄球菌感染的检测分子和治疗药物,具有潜在的使用价值。

全文目录

英文缩略词表  4-5
中文摘要  5-7
英文摘要  7-9
引言  9-13
第一部分单个DNA 适配子的获取  13-23
  一、材料和方法  13-20
  二、结果  20-21
  三、讨论  21-22
  四、小结  22-23
第二部分适配子亲和力和特异性的鉴定  23-30
  一、材料和方法  23-26
  二、结果  26-27
  三、讨论  27-29
  四、小结  29-30
第三部分适配子检测患者血清中的 SE  30-34
  一、材料和方法  30-31
  二、结果  31-32
  三、讨论  32-33
  四、小结  33-34
第四部分适配子在大鼠体内对 SEB 超抗原活性抑制作用的研究  34-39
  一、材料和方法  34
  二、结果  34-36
  三、讨论  36-38
  四、小结  38-39
参考文献  39-44
致谢  44-45
综述  45-54

金黄色葡萄球菌肠毒素B适配子的筛选及初步应用

内容摘要

全文目录

相似论文