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TGF-β1调控头颈鳞癌上皮—间质转化及其侵袭的实验研究

作　者: 余长云
导　师: 张欣
学　校: 中南大学
专　业: 耳鼻咽喉科学
关键词: 头颈鳞癌 TGF-β1 EMT 侵袭 Smad2
分类号: R739.91
类　型: 硕士论文
年　份: 2010年
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内容摘要

目的：研究表明,上皮-间质转化(epithelial to mesenchymal transition,EMT)在上皮源性肿瘤转移中起着十分重要的作用。近年来,EMT在头颈鳞癌中也得到证实,但其形成的分子机制并不十分清楚。由于转化生长因子(TGF-β1)调控多种肿瘤EMT形成并与肿瘤转移相关,成为研究的重点,本研究应用TGF-β1刺激头颈鳞癌细胞,观察刺激后细胞EMT相关表现及其侵袭情况,并进一步探讨相关机制。方法：1)不同浓度TGF-β1刺激头颈鳞癌细胞Tu686后,MTT法检测细胞生长增殖情况；2)不同浓度TGF-β1刺激头颈鳞癌细胞Tu686后,于不同时间点观察细胞形态变化,RT-PCR及Western-blot检测上皮细胞标志物E-cadherin及间质细胞标志物Vimentin表达情况,同时检测TGF-β1信号通路中Smad2、p-Smad2表达情况；3)划痕实验及Transwell侵袭小室实验比较TGF-β1刺激前后Tu686细胞迁移及侵袭潜能的变化；4)用siRNA沉默Smad2后,Western-blot检测EMT标志蛋白E-cadherin表达水平,Transwell侵袭小室实验比较Tu686细胞侵袭能力的改变。结果：1)TGF-β1对头颈鳞癌细胞Tu686生长增殖无显著影响；2)TGF-β1刺激后,Tu686细胞发生形态学改变,表现为细胞间松散,细胞形态不规则,有伪足形成；3) TGF-β1刺激后,Tu686细胞上皮性标志物E-cadherin表达下调,而间质性标志物Vimentin表达增强,且具有浓度和时间依赖性；同时检测到p-Smad2表达也增强,而Smad2表达基本不变；4) TGF-β1刺激后,Tu686细胞细胞迁移及侵袭潜能较对照组明显增强；5) Smad2 siRNA干扰后,Tu686细胞上皮性标志物E-cadherin表达增强,细胞侵袭潜能降低。结论：1) TGF-β1对头颈鳞癌细胞Tu686生长增殖无显著影响；2) TGF-β1能诱导头颈鳞癌细胞株Tu686发生EMT改变,并同时增强Tu686细胞体外迁移侵袭能力；3)Smad2磷酸化在TGF-β1介导的头颈鳞癌细胞EMT及侵袭中起重要作用。

TGF-β1调控头颈鳞癌上皮—间质转化及其侵袭的实验研究

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