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外源性锌离子阻断感光细胞与双极细胞间的视觉信号传导并下调视网膜TRPM1的表达

作　者: 刘玉
导　师: 雷博
学　校: 重庆医科大学
专　业: 眼科学
关键词: TRPM1 锌离子 ON-双极细胞视网膜电图视网膜
分类号: R774.1
类　型: 硕士论文
年　份: 2013年
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内容摘要

目的：在视网膜中，瞬时受体电位离子通道蛋白M亚家族，亚基1（Transient receptor potential melastatin1，TRPM1），位于ON-双极细胞上，参与ON-双极细胞的去极化过程。在脊椎动物的离体视网膜研究中发现，锌离子是TRPM1的阻断剂，但其对活体哺乳动物视网膜功能的影响尚不清楚。本实验旨在探讨锌离子是否影响哺乳动物视觉信号的传递及TRPM1的表达。方法：将C57BL/6J小鼠随机分为对照组、实验组。实验组小鼠右眼玻璃体内注射0.4μl0.01mol/L硫酸锌溶液，对照组小鼠右眼以等体积的磷酸盐缓冲液（Phosphate-buffered saline，PBS）代替，左眼均未做注射。为探讨锌离子的作用时间，分别于注射后1小时、1天、1周、4周、8周后行暗适应和明适应视网膜电图（Electroretinogram，ERG）检查。用Western blotting检测注射后1天的小鼠视网膜中TRPM1的表达水平。用免疫荧光法分别标记注射后1天和8周的小鼠视网膜PKCα和CtBP2，以观察视网膜光感受器和突触的结构及形态变化。此外，将50μl0.05mol/L硫酸锌溶液注射入恒河猴一眼玻璃体内，并于注射后2小时行暗适应、明适应ERG及ON-OFF反应检查。结果：在注射硫酸锌溶液后1天—8周，观察到小鼠有类似的负波形ERG：暗适应和明适应的ERG-b波振幅明显降低，而a波相对正常。恒河猴玻璃体腔注射硫酸锌后也得到了类似结果。在ON-OFF反应中，ERG-b波振幅明显降低，a波则无明显改变。实验组小鼠视网膜中的TRPM1表达量下降。免疫荧光显示：注射后1天的实验组小鼠1天视网膜形态结构无明显改变。8周后，内层视网膜变薄，内核层尤为明显，视杆ON-双极细胞数量减少，异位的视杆双极细胞树突向外核层延伸，同时光感受器突触带数量明显减少，外核层可见异位的突触带。结论：锌离子能阻断视网膜感光细胞和视杆和视锥系统ON-双极细胞间的视觉信号传递，对感光细胞的功能影响不明显。锌离子能下调TRPM1蛋白的表达。由此推测，锌的短期效应可能是通过下调TRPM1影响mGluR6-Gα0-TRPM1功能，从而阻断了ON-双极细胞去极化。锌的长期效应主要是对视网膜内层的毒性反应，表现为双极细胞层、外丛状层的结构紊乱及异位突触结构的出现。

全文目录

英汉缩略语名词对照  5-6
中文摘要  6-8
英文摘要  8-11
前言  11-12
1 材料  12-14
2 方法  14-18
3 结果  18-23
4 讨论  23-25
全文总结  25-26
参考文献  26-30
文献综述  30-41
  参考文献  37-41
致谢  41-42
攻读硕士学位期间发表的论文  42-43

外源性锌离子阻断感光细胞与双极细胞间的视觉信号传导并下调视网膜TRPM1的表达

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