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Toll样受体2、3和4在头颈部鳞状细胞癌中的表达及意义

作　者: 王筱静
导　师: 王郡甫
学　校: 济南大学
专　业: 免疫学
关键词: Toll样受体 喉癌 下咽癌 Western blot RT-PCR 免疫组织化学
分类号: R739.91
类　型: 硕士论文
年　份: 2013年
下　载: 6次
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内容摘要


研究目的喉癌、下咽癌是恶性程度极高的一种肿瘤，以鳞癌多见，约占全身恶性肿瘤的1-5%，常伴有周围淋巴结的转移，目前手术切除是治疗此类疾病的主要方法。此类肿瘤的发生是多因素协同效应的结果。其中，慢性炎症在咽喉部肿瘤的发生、发展过程中起重要作用。Toll样受体(Toll-like receptor，TLR)是重要的模式识别受体(pattern recognitionreceptor，PRR)家族，识别高度保守的微生物成分-病原相关分子模式(pathogen-associatedmolecular pattern，PAMP)以及内生性损伤信号相关分子模式(damage-associated molecularpattern，DAMP）。TLR是经典的跨膜蛋白，作为最具特征性的模式受体分子，TLR可以募集多种配体蛋白，激发信号转导，导致特异性转录因子的活化，最终产生抗菌肽、促炎性细胞因子和趋化因子、抗病毒细胞因子、黏附分子以及其它活性因子。研究发现，TLR不仅在免疫细胞中表达，还在多种恶性肿瘤细胞，尤其是炎症相关性肿瘤细胞呈现高表达，并且在肿瘤的发生、发展和治疗中发挥重要作用。本研究拟在转录水平及蛋白水平研究TLR2、3和4在喉癌及下咽癌组织中的表达情况，并以癌旁组织及息肉组织为对照。在本研究结果的基础上，参考并结合其他研究成果，探讨TLR2、3和4在喉癌及下咽癌发生、发展、侵袭及转移过程中的作用，以期为癌症的临床诊断、预防及治疗提供更多的科研思路。研究方法和结果1. RT-PCR法检测TLR2、3和4mRNA在不同组织中的表达水平1.1TLR2、3和4mRNA在癌组织与息肉组织中的表达差异TLR2、3和4在癌组织中均有表达，而在息肉组织中几乎不表达。其中TLR4表达最强，其次是TLR2。TLR2、3和4在癌组织中的表达强度显著强于息肉组织，TLR2t值=6.723，TLR3t值=4.976，TLR4t值=7.645。P <0.01。统计学分析结果具有显著意义。1.2TLR2、3和4mRNA在癌组织与癌旁组织中的表达差异TLR2、3和4mRNA在癌组织及癌旁组织中均有表达，它们在癌组织中的表达强度显著高于癌旁组织，分别为: TLR2t值=6.179，TLR3t值=4.831, TLR4t值=6.057，P <0.01。统计学分析结果具有显著意义。1.3TLR2、3和4mRNA在不同肿瘤分期的中的表达差异TLR2、3和4mRNA在肿瘤临床分期及TNM分期中的表达有显著差异，其表达强度随分期增加而增强。ANOVA分析结果：临床分期中：TLR2F值=5.150，TLR3F值=3.700，TLR4F值=4.862，P均<0.05。TNM(N)分期中：TLR2F值=5.562，TLR3F值=7.200，TLR4F值=15.039，P <0.05。统计学分析结果均具有显著意义。1.4TLR2、3和4mRNA在癌组织病理学分级中的表达差异TLR2、4mRNA在癌组织中的表达强度与肿瘤恶性程度显著相关，TLR3mRNA在癌组织中的表达强度与肿瘤恶性程度无显著统计学意义。2. Westeron blot法检测TLR2、4蛋白在不同组织中的表达水平2.1TLR2、4蛋白在癌组织与息肉组织中的表达差异TLR2、4蛋白在癌组织中的表达强度明显高于息肉对照组织。2.2TLR2、4蛋白在癌组织与癌旁组织中的表达差异TLR2、4蛋白在癌组织中的表达强度明显高于癌旁组织。2.3TLR2、4蛋白在不同肿瘤分期的中的表达差异TLR2、4蛋白在癌组织中的表达强度随肿瘤临床分期及TNM分期的增加而增强。2.4TLR2、4蛋白在肿瘤组织病理学分级中的表达差异TLR2、4蛋白在癌组织中的表达强度随肿瘤恶性程度的增加而表达增强。3.免疫组化法检测TLR2、4蛋白在细胞中的表达部位。在细胞膜与细胞质内均可见抗体结合反应，表明TLR2及TLR4表达于细胞膜与细胞质内。研究结论：1. TLR2、3和4mRNA及TLR2、4蛋白在喉癌、下咽癌癌组织中的表达较为普遍，而在息肉组织中基本不表达。2. TLR2及TLR4表达于细胞膜与细胞质内。3. TLR2、3和4mRNA及TLR2、4蛋白在喉癌、下咽癌癌组织中的表达强度较在癌旁组织显著增强。4. TLR2、3和4mRNA及TLR2、4蛋白在喉癌、下咽癌癌组织中的表达强度随肿瘤临床分期的增加而增强。5. TLR2、3和4mRNA及TLR2、4蛋白在喉癌、下咽癌癌组织中的表达强度随肿瘤N分期的增加而增强。6. TLR2、4mRNA及蛋白在癌组织中的表达强度与肿瘤恶性程度显著相关，TLR3mRNA及蛋白在癌组织中的表达强度与肿瘤恶性程度无显著统计学意义。研究意义本课题明确了喉癌、下咽癌组织中TLR2、3和4在转录水平及TLR2、4在蛋白水平的表达情况及表达部位，以及TLR2、3和4的表达水平与肿瘤分期及淋巴结转移的关系，为临床应用提供理论依据。

全文目录


摘要  8-11
ABSTRACT  11-15
主要符号表  15-17
前言  17-18
材料与方法  18-25
  1. 主要材料及仪器  18-22
    1.1 主要材料  18-21
    1.2 主要仪器  21-22
  2．实验方法  22-25
    2.1 TLR2、3 和 4 mRNA 在喉癌、下咽癌组织及癌旁组织、声带息肉组织中的表达  22-23
      2.1.1 组织标本采集与 TLR2、3、4 引物设计  22
      2.1.2 GIT 法提取组织总 RNA  22
      2.1.3 总 RNA 浓度测定  22
      2.1.4 RT-PCR 反应  22-23
      2.1.5 1.2%琼脂糖凝胶电泳分析  23
    2.2. TLR2、4 蛋白在不同组织中的表达  23-25
      2.2.1 蛋白质的提取  23
      2.2.2 考马斯亮蓝法测定蛋白浓度  23
      2.2.3 SDS-PAGE  23-24
      2.2.4 western blot  24-25
    2.3 免疫组化  25
      2.3.1 病理标本制备  25
      2.3.2 免疫组化染色  25
  3. 统计学处理方法  25
结果  25-37
  1. RT-PCR 法检测 TLR2、3 和 4 mRNA 在不同组织中的表达水平  25-32
    1.1. TLR2、3 和 4 mRNA 在癌组织与息肉组织中的表达差异  25-27
    1.2 TLR2、3 和 4 mRNA 在癌组织与癌旁组织中的表达差异  27-28
    1.3 TLR2、3 和 4 mRNA 在不同肿瘤分期中的表达差异  28-31
    1.4 TLR2、3 和 4 mRNA 在癌组织病理学分级中的表达差异  31-32
  2. Westeron blot 法检测 TLR2、4 蛋白在不同组织中的表达水平  32-35
    2.1 TLR2、4 蛋白在癌组织与息肉组织中的表达差异  32-33
    2.2 TLR2、4 蛋白在癌组织与癌旁组织中的表达差异  33
    2.3 TLR2、4 蛋白在肿瘤不同临床分期中的表达差异  33-35
    2.4 TLR2、4 蛋白在癌组织病理学分级中的表达差异  35
  3. 免疫组化法检测TLR2、4蛋白在癌组织中的表达部位  35-37
结果  37-38
讨论  38-45
结论  45-46
参考文献  46-51
综述  51-60
  参考文献  57-60
攻读硕士学位期间发表的学术论文  60-61
致谢  61

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中图分类: > 医药、卫生 > 肿瘤学 > 其他部位肿瘤 > 头、颈、肩部肿瘤
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