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雌激素反应性指蛋白Efp对Polo样激酶3作用的研究

作　者: 陈平
导　师: 单保恩；艾军
学　校: 河北医科大学
专　业: 免疫学
关键词: 乳腺癌 MCF-7细胞裸鼠荷瘤 Efp Plk3
分类号: R737.9
类　型: 硕士论文
年　份: 2014年
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内容摘要

目的：对于雌激素受体(estrogen receptor, ER)阳性的乳腺癌患者，内分泌治疗是其最有效的综合治疗方案之一。然而，目前临床上大约40%的ER阳性乳腺癌患者对内分泌治疗产生原发或继发性耐药，这为乳腺癌治疗构成严重阻碍。雌激素反应性指蛋白（Estrogen-responsive finger protein, Efp）是ER信号通路的重要下游靶蛋白之一。作为一种E3泛素连接酶，其结构域中的B-box与卷曲螺旋可特异性地干扰细胞周期负调控因子14-3-3σ，通过泛素蛋白酶体途径介导14-3-3σ降解，这一途径是导致ER阳性乳腺癌患者内分泌治疗耐药的原因之一。最近研究显示，在乳腺癌组织中，Polo样激酶3（Plk3）的表达与ER表达呈负相关，并且Plk3可抑制ER+乳腺癌细胞的增殖，而前者可被DNA损伤检测点激活，通过介导细胞周期停滞为受损DNA提供修复时间来抑制原癌基因发生转变，降低缺陷基因的积累，是一种潜在的抑癌基因。另外，Plk3在细胞内很容易被降解且可以被蛋白酶抑制剂MG132稳定，据此推测，Plk3在乳腺癌细胞中的低表达有可能也是由Efp通过泛素途径降解引起。为了验证这一假设，我们设计了本课题，旨在研究ER阳性乳腺癌细胞与乳腺癌组织中Efp与Plk3的表达情况及其之间的相互关系，以期为Efp在雌激素依赖型乳腺癌内分泌治疗耐药机制中的作用提供新的实验数据和理论依据。方法：1应用实时定量PCR检测54例乳腺癌患者乳腺癌组织中Efp与Plk3mRNA的表达状况，以及其与相关临床病理指标间的关系。2应用基因转染、RT-PCR方法研究Efp mRNA及Plk3mRNA在ER阳性乳腺癌细胞中的表达状况。3利用基因转染、原位移植方法构建裸乳腺癌鼠荷瘤模型，测量生长中的瘤体变化，绘制肿瘤生长曲线，实验结束处死小鼠后称量瘤体重量，并分析转染Efp与Plk3基因处理对肿瘤发展的影响。4通过免疫组织化学方法检测小鼠移植瘤组织中Efp与Plk3蛋白的表达状况，并分析两者表达之间的关系。结果：154例乳腺癌患者乳腺癌组织中Efp与Plk3mRNA表达的相对定量分析结果显示，Efp与Plk3基因表达呈正相关（r=0.554，P<0.01）。Efp、Plk3mRNA表达水平与患者年龄、肿瘤大小、绝经状况、淋巴结转移情况、病理分期和病理类型无明显关系。Efp与K-i67蛋白表达状态有关（P=0.043）；Plk3与ER蛋白表达有关（P=0.012)，且具有正相关性（r=0.307，p=0.025）。2RT-PCR分析结果显示，于MCF-7细胞系单独转染Efp质粒后，Plk3mRNA表达水平明显低于Efp未转染组（P＜0.01）；与单独转染Plk3组相比，共转Efp和Plk3质粒组细胞Plk3mRNA表达水平明显降低（P＜0.01）。3成功建立ER阳性乳腺癌细胞MCF-7移植瘤裸鼠荷瘤模型。肿瘤瘤体积测量方差分析结果显示，转染空载体质粒瘤细胞对照处理组、单独转染Efp基因处理组、共同转染Efp和Plk3基因处理组和单独转染Plk3基因处理组小鼠的瘤体生长趋势无明显差异（F=0.009，P>0.05）。实验结束时称量该四组荷瘤小鼠瘤体重量分别为：转染空载体质粒瘤细胞对照处理组小鼠为1.88±0.15g，单独转染Efp基因处理组小鼠为2.13±0.19g，共同转染Efp和Plk3基因处理组小鼠为1.96±0.23g，单独转染Plk3基因处理组小鼠为1.87±0.12g。单独转染Efp基因处理组小鼠瘤体重量与空载体质粒转染对照组相比明显增加（P=0.049），单独转染Efp基因处理组小鼠瘤体重量与单独转染Plk3基因处理组小鼠相比明显增加（P=0.033）。4免疫组织化检测结果显示，Plk3蛋白在空载体基因转染对照处理组、单独转染Efp基因处理组、共同转染Efp和Plk3基因处理组，单独转染Plk3基因处理组小鼠肿瘤组织中的表达积分光密度值（integratedoptical density，IOD）分别是：8.26±1.15、2.48±0.04、4.57±0.06、9.75±0.02。与转染Efp基因处理组小鼠相比，Plk3蛋白在肿瘤组织中的表达水平明显高于Efp未转染组小鼠（P＜0.05）；与单独转染Plk3处理组相比，共转染Efp和Plk3基因处理过组小鼠肿瘤组织中Plk3蛋白表达水平明显降低（P＜0.05）。结论：在mRNA与蛋白水平， Efp在乳腺癌细胞或组织中可降低Plk3的表达。

全文目录

摘要  4-7
ABSTRACT  7-10
引言  10-11
第一部分 Efp、Plk3 mRNA 在乳腺癌组织中表达的定量分析  11-25
  前言  11-12
  材料和方法  12-15
  结果  15-17
  附图  17-19
  附表  19-21
  讨论  21-22
  结论  22
  参考文献  22-25
第二部分外源性雌激素反应性指蛋白 Efp 对 Plk3 表达影响的研究  25-48
  前言  25
  材料和方法  25-34
  结果  34-36
  附图  36-42
  附表  42-44
  讨论  44-45
  结论  45
  参考文献  45-48
综述 E3 泛素连接酶及其与肿瘤关系的研究进展  48-59
  参考文献  54-59
致谢  59-60
个人简历  60

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