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苍白球内侧部注射siRNA沉默GAD基因治疗PD大鼠的实验研究

作　者: 孔令菊
导　师: 郑德宇
学　校: 辽宁医学院
专　业: 人体解剖与组织胚胎学
关键词: 帕金森病苍白球内侧部基因治疗谷氨酸脱羧酶
分类号: R742.5
类　型: 硕士论文
年　份: 2013年
下　载: 3次
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内容摘要

目的应用立体定位技术将谷氨酸脱羧酶（glutamic acid decarboxylase2, GAD65）高效特异的siRNA注射到PD大鼠苍白球内侧部(internal segment of globuspallidus，GPi)沉默GAD65，观察基因治疗后PD大鼠运动行为变化、脑内递质含量变化和基因治疗前后电生理的变化、，为帕金森病的治疗探索一个新的注射靶点。方法将PD大鼠随机分成空白对照组，载体对照组和基因治疗组，每组24只鼠，分别按照4W，8W，16W的时间点，每组随机取出8只鼠，通过行为学检测（旋转实验、步态实验）观察大鼠的运动情况；通过免疫组织化学检测脑内Glutamicacid、GABA含量的变化及GAD65、TH阳性神经元的表达；通过蛋白印迹（Western blot）、高效液相色谱（HPLC）；通过电生理检测观察大鼠神经元自发放电的变化。结果6-OHDA损伤后8周，有60%的大鼠30分钟平均转速大于210转。步态实验观察PD大鼠的足迹，两侧前肢比较可看出患肢活动受限，导致足迹明显变小变浅。GPi基因注射后4W~16W，基因治疗组的PD大鼠的旋转圈数较其它两组低(P<0.001)，两组对照组之间均无统计学意（p>0.05）。免疫组织化学法检测GAD65表达水平，发现在右侧（正常）无GAD65阳性细胞存在，而基因治疗组左侧则有较明显的GAD65阳性神经元的存在，术后4W、8W、16W，GAD65阳性细胞数呈时间性递减趋势。Western blot检测结果：在4W、8W、16W时间点，基因治疗组出现浓厚的GAD65特异性条带，蛋白含量呈递减趋势。与载体对照组和空白对照组相比较，蛋白含量增多，但二者间没有统计学差异(P>0.05)，高效液相色谱分析在基因治疗组GPi的谷氨酸含量明显降低，而GABA的含量则明显增高。电生理检测GPi神经元自发放电频率，发现正常状态不规则放电较多，规则放电、爆发式放电较少，而基因治疗组规不规则放电较少，规则放电、爆发式放电较多。结论1. GPi注射siRNA沉默GAD65，可以改善由阿扑吗啡诱发的大鼠旋转行为，提高患肢的利用率。2.GPi注射siRNA沉默GAD65，可以减GPi中谷氨酸的含量，增加GABA的含量。3. GPi注射siRNA沉默GAD65，,从功能学上证明，可以缓解PD的症状

全文目录

中文论著摘要  4-6
英文论著摘要  6-9
英文缩略语表  9-10
前言  10-12
实验材料与方法  12-24
结果  24-34
讨论  34-37
结论  37-38
本研究创新性自我评价  38-39
参考文献  39-42
附录  42-54
  综述  42-51
    参考文献  47-51
  在学期间科研成绩  51-52
  致谢  52-53
  个人简介  53-54

苍白球内侧部注射siRNA沉默GAD基因治疗PD大鼠的实验研究

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