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MARCCT-1在肾透明细胞癌中的表达以及对人肾癌细胞株A498生物学特性影响的实验研究

作　者: 王承
导　师: 王林辉
学　校: 第二军医大学
专　业: 外科学
关键词: 肾透明细胞癌 lncRNA MARCCT-1 转移细胞增殖细胞侵袭细胞迁移
分类号: R737.11
类　型: 硕士论文
年　份: 2013年
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内容摘要

研究背景和目的：肾癌(renal cell carcinoma, RCC)是泌尿外科最常见的恶性肿瘤之一,其发病率高,仅次于膀胱癌,占成人所有恶性肿瘤的2%-～3%,其病理分型以肾透明细胞癌(clear renal cellcarcinoma, ccRCC)多见,占70%～80%左右。肾癌的发病率和死亡率在过去的50年中持续上升。肾癌侵袭转移能力较强,术后复发率高,转移性肾癌预后差,因此,研究RCC侵袭转移的机制,筛选出反映RCC侵袭转移及预后的肿瘤标志物,对于RCC患者的治疗和预后评估均具有重大意义。目前已经有多个研究证实lncRNA与肿瘤的发病、转移、复发密切相关,并找到了部分肿瘤特异性lncRNAs,因此,我们推测在肾癌侵袭转移过程中很可能存在相关的lncRNAs,而lncRNAs在肾透明细胞癌中的作用即是本文研究中的重点。实验方法：1.采用lncRNAs芯片技术,将肾癌患者根据临床分期分为两组：转移组(T3M1N0)组和非转移组(T1aM0N0),分别取肾癌原发灶肿瘤组织,筛选差异表达的lncRNAs;2采用RT-PCR技术检测在肾透明细胞癌肿瘤组织以及癌旁非肿瘤组织中MARCCT-1的表达情况,研究其与临床分级、病理分级、远处转移之间的关系。3.采用RNAi特异性抑制A498细胞中MARCCT-1的表达后,以CCK8法、AnnexinV/PI双染法、Transwell侵袭实验和划痕实验分别观察细胞增殖、凋亡及侵袭迁移能力的变化。结果：1.筛选出320个与肾透明细胞癌远处转移相关的差异表达lncRNA,其中114个lncRNA在出现肿瘤远处转移时表达上调,206个lncRNA在肿瘤远处转移时表达下调。2.采用RT-PCR方法检测肿瘤与配对癌旁非肿瘤组织,肿瘤组织中的MARCCT-1表达在78.6%(11例)的样本中上调,在21.4%(3例)例样本中下调,其中ccRCC中MARCCT-1的相对表达量为3.52×10-2±5.20×10-2,癌旁非肿瘤组织中的相对表达量为0.106±0.165,发现肿瘤组织中MARCCT-1表达水平较高。根据病理分级进行分组,高分化组MARCCT-1在癌组织中相对癌旁组织的表达倍数为7.66±12.19,中-低分化组为10.29±11.98,没有显著差异。在不同临床分期样本中,Ⅰ期MARCCT-1在癌组织中相对癌旁组织的表达倍数为10.53±14.19,Ⅱ～Ⅳ期为7.41±9.45,没有显著差异,提示其表达水平可能与临床分期和病理分级无明显关系。根据有无远处转移分组样本中,无远处转移组MARCCT-1在癌组织中相对癌旁组织的表达倍数为5.50±9.94,有远处转移组为21.70±9.24,发现远处转移组中MARCCT-1表达水平较高。3.采用CCK-8法观察用MARCCT-1siRNA特异性下调A498细胞中MARCCT-1表达后,结果显示在48、72、96小时后,对A498细胞增殖的抑制率分别为16.95%、18.77%、17.73%,发现对细胞增殖具有明显抑制作用。4.采用流式细胞术检测用MARCCT-1siRNA特异性下调A498细胞中MARCCT-1表达后,发现对细胞凋亡无明显作用。5.采用Transwell侵袭实验检测用MARCCT-1siRNA特异性下调A498细胞中MARCCT-1表达后,结果显示侵袭细胞数对照组704.3±82.4,转染组361.7±12.6,发现对细胞侵袭具有明显抑制作用。6.采用划痕实验检测用MARCCT-1siRNA特异性下调A498细胞中MARCCT-1表达后,发现对细胞迁移具有明显抑制作用。结论：1、发现了300多个可能与肾透明细胞癌癌侵袭转移相关的候选lncRNAs。2、肾透明细胞癌患者癌组织中的MARCCT-1的表达水平较癌旁非肿瘤组织明显上调,提示MARCCT-1表达的上调可能与肾透明细胞癌的发病机制相关。3、在肾透明细胞癌患者中,有远处转移患者癌组织相对癌旁组织的MARCCT-1表达水平较无远处转移组高,提示MARCCT-1的表达上调可能与ccRCC的肿瘤侵袭转移相关,MARCCT-1的表达水平与ccRCC的病理分级及临床分期组合无显著相关性。4、MARCCT-1siRAN能有效的转染于A498细胞,降低A498细胞中MARCCT-1的表达。5、降低MARCCT-1的表达能使A498细胞增殖能力受到抑制,同时细胞的侵袭和迁移能力减弱,对细胞凋亡无显著影响。6、MARCCT-1在肾癌中可能起着类似癌基因的作用,通过抑制MARCCT-1的表达,有望达到肾癌治疗的目的。

MARCCT-1在肾透明细胞癌中的表达以及对人肾癌细胞株A498生物学特性影响的实验研究

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