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人脂肪间充质干细胞来源的Exosomes对于乳腺癌细胞系迁移的研究

作　者: 林瑞竹
导　师: 赵春华
学　校: 北京协和医学院
专　业: 细胞生物学
关键词: 间充质干细胞 Exosomes MCF7 胚胎干细胞神经分化
分类号: R737.9
类　型: 硕士论文
年　份: 2013年
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内容摘要

Exosomes是一种直径为40-100nm的小囊泡,由细胞内多囊内吞体分泌,并通过膜融合来分泌到细胞外。Exosomes不仅包含膜组分,还可以包裹核酸,这些物质通过exosomes传递而行使功能。许多研究显示exosomes具有多种功能,对免疫系统、神经生物学以及肿瘤生物学都有影响,并且具有潜在的临床应用价值,或成为生物标记物或者治疗手段。本文的第一部分,我们研究人间充质干细胞(human mesenchymal stem cells, MSCs)来源的exosomes对乳腺癌的转移的影响。乳腺癌是严重威胁女性生命健康的恶性肿瘤。随着医学的进步,对乳腺癌的诊断和治疗水平有了很大提高。但是,大部分乳腺癌患者终将死于癌症的复发和转移。hMSCs的条件培养基(conditioned medium, CM)可以影响肿瘤细胞生物学特性,但是具体机制一直不清楚。本研究显示MSCs可以分泌40-100nm,具有exosomes典型特征的小微粒；并且这些MSCs来源的exosomes可以促进乳腺癌细胞系MCF7的迁移。全基因表达谱显示,在用exosome处理MCF7后,MCF7中一些肿瘤相关的信号通路被上调,并且之后的研究进一步证实了Wnt信号通路被激活。本研究揭示了MSC-CM促进肿瘤细胞迁移的一个新的机制。本文的第二部分,我们研究探讨将小鼠胚胎干细胞(mESCs)定向诱导为神经干细胞(NSCs)的分化方法。首先通过在无血清的培养基中,诱导mESCs先形成神经上皮细胞(NPCs),再通过形成“神经球样”细胞团并且添加EGF和FGF2的方式,诱导为NSCs。通过细胞系46C监测NPCs的形成,同时对分化各阶段细胞进行定量PCR和免疫荧光染色,以在不同水平检测细胞分化效果。结果显示诱导mESC向神经细胞分化,约5d出现大量Soxl+细胞,形成rosette结构,即神经上皮细胞(NPCs);悬浮培养1-2天后形成“神经球样”细胞团,第3天收集细胞团消化为单细胞后重新铺种；7d左右细胞成双极样。取2代、6代NSCs做定量PCR检测神经干细胞标志,结果为：Pax6、Nestin、Mash1、BLBP大量表达。取第8代NSCs进行免疫组荧光染色,结果为Nestin+、RC2+、Pax6+。结论：成功诱导mESC生成神经干细胞,并且可以在体外连续稳定的传代。

全文目录

中文摘要  4-5
Abstract  5-7
第一部分  7-32
  导言  7
  材料与方法  7-19
  实验结果  19-28
  讨论  28
  结论  28-29
  参考文献  29-32
第二部分  32-44
  导言  32-33
  材料与方法  33-37
  实验结果  37-42
  讨论  42
  结论  42-43
  参考文献  43-44
论文综述  44-60
  参考文献  58-60
中英文缩略词表  60-63
论文题录  63-64
致谢  64-67

人脂肪间充质干细胞来源的Exosomes对于乳腺癌细胞系迁移的研究

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