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萆薢总皂苷对高尿酸血症大鼠尿酸转运蛋白表达的影响

作　者: 朱立然
导　师: 陈光亮
学　校: 安徽中医药大学
专　业: 中药学
关键词: 萆薢总皂苷 高尿酸血症 尿酸盐阴离子转运体1 人有机阴离子转运蛋白1 人有机阴离子转运蛋白3 腺嘌呤 乙胺丁醇
分类号: R285.5
类　型: 硕士论文
年　份: 2013年
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内容摘要


背景：高尿酸血症（Hyperuricemia）是产生尿酸性肾损害和痛风性关节炎的重要生化基础。尿酸在肾脏的排泄主要依赖于肾小管上皮细胞刷状缘侧（管腔膜）和基底外侧膜上的转运蛋白，即负责尿酸重吸收的尿酸盐阴离子转运体1（urate-anion transporter1, URAT1），及负责尿酸分泌的有机阴离子转运体（organic-aniontransporter, OAT1和OAT3）等。萆薢总皂苷（total saponin of dioscorea，TSD）是从薯蓣科植物绵萆薢中提取的一类有效成分，其主要活性成分为甾体皂苷类。目的：研究萆薢总皂苷对大鼠高尿酸血症的防治作用及对肾小管尿酸转运蛋白表达的影响方法：雄性SD大鼠90只，随机取15只作为正常组，其余大鼠以腺嘌呤100mg·kg-1+乙胺丁醇250mg·kg-1灌胃造模，每天1次，连续6周。于造模第14天大鼠眼眶取血，测定血清尿酸水平。按照血清尿酸值将大鼠随机均分为模型组、萆薢总皂苷高(300mg·kg-1)、中(90mg·kg-1)、低(30mg·kg-1)剂量组、苯溴马隆组(10mg·kg-1)。分组后灌胃给药，每天1次，连续28天。分别于给药第13-14天、第27-28天留尿，收集大鼠24h尿液，记录尿量，测定大鼠尿尿酸、尿肌酐并计算尿酸排泄量。给药d14、d28取血测定大鼠血清尿酸、黄嘌呤氧化酶（XOD）、肌酐和尿素氮水平，计算肌酐清除率、尿酸清除率。肾组织行HE染色做肾病理观察，免疫组化方法测定肾小管上皮细胞中URAT1（renal uate-anion exchanger）、OAT1（organic anion transporter1）、OAT3（organic anion transporter3）表达。另剪取肾皮质于液氮保存，RT-PCR方法检测URAT1mRNA在肾小管上皮细胞中的表达量。结果：与正常组大鼠相比，腺嘌呤+乙胺丁醇灌胃14天后，造模大鼠血清尿酸（UA）水平显著增加（P<0.01）。分组后，各组继续给造模剂，与正常组相比，给药后，模型组大鼠血清尿酸水平(μmol·L-1,276.5±68.0vs104.7±15.66,266.3±83.0vs108.4±14.94,P<0.01),尿尿酸浓度(μ mol·L-1,1638.6±317.7vs1009.3±311.17,1601.4±392.5vs971.7±222.35,P<0.01)、24h尿酸排泄量（μmol,26.9±5.6vs16.4±3.88,27.1±6.2vs17.5±3.33,P<0.01）、尿酸清除率（ml·min-1,0.070±0.0vs0.110±0.03，0.075±0.0vs0.113±0.02）、血清肌酐（Cr）(μmol·L-1,87.9±10.5vs58.6±6.72,92.1±8.2vs58.9±6.51,P<0.01)、肌酐清除率（ml·min-1,0.918±0.218vs1.590±0.352,0.843±0.113vs1.666±0.229）、尿素氮（BUN）(mmol·L-1,9.89±3.01vs4.91±0.46,11.40±2.85vs5.00±0.48, P<0.01)、黄嘌呤氧化酶（XOD）活力(U·L-1,31.42±6.15vs19.17±3.20,30.52±6.82vs18.05±2.45,P<0.01)、显著增加。肾近曲小管上皮细胞中, OAT1、OAT3蛋白的表达显著减少、 URAT1蛋白及mRNA表达量显著升高（P<0.01）。HE染色结果显示模型组大鼠肾组织可见局灶性间质纤维化，部分肾小球萎缩及硬化，另有部分肾小管呈囊性扩张，见少量棕褐色尿酸盐结晶沉积。电镜下形态学观察模型组线粒体嵴断裂、基质较浅,近曲小管可见细胞核染色质凝聚,绒毛稀疏、细胞核变性，胞浆可见较多的溶酶体。与模型组比较，给药后,萆薢总皂苷高、中、低剂量组大鼠血尿酸水平显著降低(μmol·L-1,217.4±48.1,215.4±45.9,222.5±45.5vs276.5±68.0，P<0.01)、尿酸清除率显著增加（P<0.01），而大鼠尿量未见明显增加；尿尿酸水平、24h尿酸排泄量均有增加趋势，但无明显差异。萆薢总皂苷高剂量组大鼠血清肌酐（Cr）水平、肌酐清除率、血清尿素氮（BUN）水平、血清XOD活力显著降低（P<0.050.01）。肾近曲小管上皮细胞中,萆薢总皂苷高、中剂量组OAT1、OAT3蛋白表达显著增加，URAT1蛋白及mRNA表达显著减少（P<0.01）。HE染色结果显示：萆薢总皂苷高、中剂量组极少见间质纤维化，伴有少量淋巴和单核细胞的浸润，少量肾小球萎缩、无硬化，可见部分肾小管上皮细胞水肿变性，未见棕褐色结晶沉积。低剂量组可见数量较多的间质纤维化，伴有大量淋巴和单核细胞的浸润，少量肾小球萎缩、无硬化，大量肾小管上皮细胞水肿变性。电镜下形态学观察萆薢总皂苷高、中剂量组近曲小管结构较好,线粒体及细胞桥链结构完整，未见细胞核变性、胞浆空泡化，曲管间胶原纤维较正常组稍有增多，肾脏的病变程度均有改善。结论：萆薢总皂苷可显著降低腺嘌呤+乙胺丁醇所致高尿酸血症大鼠的血清尿酸水平；其作用机制可能与萆薢总皂苷下调URAT1高表达、上调OAT1、OAT3低表达导致尿酸排泄增加有关,抑制黄嘌吟氧化酶活性也可能是其作用机制之一。

全文目录


中文摘要  6-9
Abstract  9-13
英文缩略词表  13-14
1 前言  14-15
2 材料与方法  15-17
  2.1 实验动物  15
  2.2 萆薢总皂苷（TSD）的制备  15-16
  2.3 药品及试剂  16
  2.4 仪器  16-17
3 实验方法  17-22
  3.1 高尿酸血症大鼠模型的建立及分组  17
  3.2 给药  17
  3.3 观察指标  17-22
4 实验结果  22-35
  4.1 萆薢总皂苷对大鼠一般情况的影响  22
  4.2 萆薢总皂苷对高尿酸血症大鼠体重的影响  22-23
  4.3 萆薢总皂苷对高尿酸血症大鼠血尿酸的影响  23-24
  4.4 萆薢总皂苷对高尿酸血症大鼠尿尿酸及 24h 尿酸排泄量的影响  24-26
  4.5 萆薢总皂苷对高尿酸血症大鼠血清肌酐、尿肌酐、肌酐清除率的影响  26-27
  4.6 萆薢总皂苷对高尿酸血症大鼠血清尿素氮的影响  27-28
  4.7 萆薢总皂苷对高尿酸血症大鼠血清 XOD 的影响  28
  4.8 萆薢总皂苷对高尿酸血症大鼠肾脏病理组织学的影响  28-29
  4.9 免疫组化法检测萆薢总皂苷对高尿酸血症大鼠肾小管上皮细胞 URAT1、OAT1、OAT3 表达的影响  29-32
  4.10 RT-PCR 方法检测萆薢总皂苷对高尿酸血症大鼠肾小管上皮细 URAT1mRNA 表达量的影响  32-34
  4.11 超微病理学检查萆薢总皂苷对高尿酸血症大鼠肾脏病理组织学的响  34-35
5 讨论  35-44
  5.1 现代医学对高尿酸血症的认识  35-38
  5.2 高尿酸血症的研究现状  38-39
  5.3 中医对高尿酸血症的认识及治疗药物现状  39-41
  5.4 本课题组造模方法及阳性药的选择  41
  5.5 萆薢总皂苷对腺嘌呤加乙胺丁醇致大鼠高尿酸血症的影响及机制分析  41-44
6 存在问题及展望  44-45
  6.1 本课题的不足之处  44
  6.2 未来的研究展望  44-45
7. 结论  45-46
参考文献  46-52
尿酸转运蛋白研究进展  52-62
  参考文献  59-62
致谢  62-63
个人简介  63

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中图分类: > 医药、卫生 > 中国医学 > 中药学 > 中药药理学 > 中药实验药理
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