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藏药蔓菁多糖的制备、组分分析及抗急性低压缺氧损伤作用的研究

作　者: 杨永东
导　师: 张艺
学　校: 成都中医药大学
专　业: 药物化学
关键词: 藏药蔓菁多糖急性低压缺氧质量控制
分类号: R29
类　型: 硕士论文
年　份: 2013年
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内容摘要

蔓菁为十字花科植物芜菁Brassica rapa L的干燥块根,秋季块根成熟时采收。在藏药中,蔓菁又名“妞玛”(《四部医典》),西藏通称其为“蔓菁”、“圆根”(或“芫根”)。藏医传统理论认为,蔓菁块根“祛风、生‘赤巴’、滋补、解毒,治‘培根病’、‘龙病’、虚弱、中毒病”,主治“各种中毒症,‘龙’病,身体虚弱”,现代研究表明,蔓菁提取物具有抗缺氧、提高免疫力、抗辐射等活性。目前,藏药蔓菁还未建立完整的质量控制方法,蔓菁多糖对急性低压缺氧损伤作用也未见报道。目的优化藏药蔓菁多糖的提取、纯化方法,分析蔓菁多糖中各单糖组分,研究蔓菁多糖对小鼠常压缺氧和急性低氧缺氧损伤的保护作用,并据此建立藏药材蔓菁的质量控制方法。方法1、以粗多糖得率、总多糖含量和抗氧化活性的综合评分为指标,采用正交试验考察提取次数、料液比及提取时间对蔓菁多糖提取方法的影响,以色素去除率和多糖损失率为综合评价指标,通过正交试验考察脱色温度、吸附时间、活性炭用量对脱色方法的影响。2、采用PMP柱前衍生化HPLC法分析蔓菁总多糖中各单糖组分。3、采用小鼠常压缺氧实验和急性低压氧舱缺氧实验方法研究蔓菁多糖对小鼠缺氧损伤的保护作用。4、采用苯酚-硫酸法测定蔓菁块根中总多糖含量。结果1、蔓菁多糖最佳提取方法为料液比1：30,于90℃水浴回流提取3次,每次2h；最佳脱色工艺为加3%活性炭于60℃吸附40min。精制多糖得率为4.66%,,其清除DPPH自由基的IC50值为6.71g.L-1。2、蔓菁多糖由甘露糖、鼠李糖、葡萄糖醛酸、半乳糖醛酸、葡萄糖、半乳糖、阿拉伯糖7种单糖组成,其摩尔比为0.26：0.54：0.05：4.17：0.84：1：1.06。3、蔓菁多糖高剂量组(2.0g.kg-1)能明显延长小鼠的常压耐缺氧存活时间,且作用效果与0.28g.kg-1阳性对照组(诺迪康胶囊)作用效果相当。4、蔓菁多糖高剂量组可提高小鼠脑组织SOD活力(P<0.05),减少小鼠脑组织MDA的产生(JP<0.05),提高小鼠血清SOD活力(P<0.05),减少小鼠血清MDA的产生(P<0.05)；HE染色显示,蔓菁多糖高剂量组可减轻小鼠低压缺氧对脑组织的损伤。5、通过对蔓菁的性状、鉴别、检查项及含量测定进行分析,建立规范的蔓菁质量标准。6、四川省内10批蔓菁药材总多糖含量在9.10-16.32%之间,平均含量为13.19%。结论1、优选的提取、纯化方法稳定可靠,所得多糖的含量高、杂质少,适合于蔓菁多糖的工业化生产。2、蔓菁多糖能够显著保护缺氧引起的机体损伤,该作用与其显著提高机体对自由基清除力,减轻膜脂质过氧化损伤有关,提示蔓菁多糖对由于高原缺氧引起的机体损伤有保护作用。

全文目录

摘要  2-4
Abstract  4-10
中英文缩写词对照表  10-11
引言  11-14
第一章藏药蔓菁多糖的制备研究  14-29
  1 仪器与试剂  14-15
  2 药材前处理  15
  3 考察指标的测定  15-19
    3.1 粗多糖得率  15
    3.2 总多糖含量  15-16
    3.3 DPPH清除率(IC_(50))  16-18
    3.4 蛋白质含量测定(考马斯亮蓝法)  18-19
    3.5 脱色率的计算  19
  4 提取方法优化  19-24
    4.1 单因素试验  19-21
    4.2 提取方法的优化  21
    4.3 各指标测定结果  21-24
  5 sevag法脱蛋白  24-25
  6 脱色方法优化  25-27
    6.1 单因素试验  25-26
    6.2 脱色方法的优化  26
    6.3 结果  26-27
  7 蔓菁总多糖的制备及验证实验  27-28
  8 讨论  28-29
第二章蔓菁多糖中各单糖的组成分析  29-43
  1 仪器与试药  29-30
  2 实验方法  30-42
    2.1 对照品溶液的配制  30
    2.2 供试品溶液的制备  30-31
    2.3 衍生化步骤  31-32
    2.4 色谱条件的选择  32-36
    2.5 线性关系的考察  36-37
    2.6 方法学考察  37-41
    2.7 蔓菁多糖样品中单糖组成分析  41-42
  3 讨论  42-43
第三章蔓菁多糖的抗缺氧作用研究  43-50
  1 蔓菁多糖对常压小鼠缺氧耐受力影响  43-45
    1.1 实验材料  43-44
    1.2 实验方法  44
    1.3 数据处理  44-45
    1.4 实验结果  45
  2 蔓菁多糖对小鼠急性低压缺氧耐受能力影响  45-49
    2.1 实验材料  45-46
    2.2 实验方法  46-47
    2.3 实验结果  47-49
  3 讨论  49-50
第四章藏药蔓菁质量标准初步研究  50-64
  1 样品来源  50
  2 仪器与试药  50-51
  3 蔓菁性状鉴别及药材的显微鉴别  51-52
    3.1 蔓菁性状鉴别  51
    3.2 蔓菁药材的显微鉴别  51-52
  4 蔓菁药材的检查项及浸出物含量测定  52-55
    4.1 检查项  52-54
    4.2 浸出物  54-55
  5 蔓菁多糖的含量测定  55-62
    5.1 蔓菁多糖的提取  55-56
    5.2 5%苯酚溶液的配置  56
    5.3 对照品溶液的配置  56
    5.4 供试品溶液的制备  56-58
    5.5 最大吸收波长的确定  58-59
    5.6 标准曲线的制备  59
    5.7 换算因子的测定  59
    5.8 方法学考察  59-60
    5.9 样品含量测定  60-61
    5.10 讨论  61-62
  6 质量标准草案的制定  62-64
第五章总结与讨论  64-66
  1 总结  64-65
    1.1 蔓菁多糖的制备方法  64
    1.2 蔓菁多糖中各单糖的组成分析  64
    1.3 蔓菁多糖抗小鼠缺氧耐受力的影响  64-65
    1.4 蔓菁药材质量标准的建立  65
  2 讨论  65
  3 创新点  65-66
参考文献  66-69
综述  69-77
  参考文献  74-77
致谢  77-78
在读期间公开发表的学术论文、专著及科研成果  78-79

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