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RBP4干扰调控猪脂肪细胞PI3K/Akt信号

作　者: 蒲蕾
导　师: 孙世铎
学　校: 西北农林科技大学
专　业: 动物遗传育种与繁殖
关键词: RBP4 慢病毒 前体脂肪细胞 猪 胰岛素信号通路
分类号: S858.28
类　型: 硕士论文
年　份: 2013年
下　载: 7次
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内容摘要


视黄醇结合蛋白4(Retinol binding protein4,RBP4)是一种脂肪细胞分泌的蛋白因子。多项研究表明,其表达水平的升高与胰岛素抵抗及Ⅱ型糖尿病等呈现正向相关关系,但目前已有研究仅限于相关性分析,具体作用机制尚不清楚。为明确RBP4对胰岛素信号通路影响的机制,首先研究RBP4在不同日龄大白猪的各个组织中和猪前体脂肪细胞分化各个阶段的表达情况；分析脂肪细胞分化后期及不同日龄大白猪脂肪组织中RBP4与PI3K/Akt信号通路相关基因的表达关系；之后通过包装RBP4干扰慢病毒并侵染猪前体脂肪细胞。进行胰岛素激活,诱导胰岛素抵抗和胰岛素通路特异抑制剂处理,利用Real time-qPCR及Western blotting方法检测RBP4的干扰效率及各处理组PI3K/Akt信号通路相关基因的表达。结果如下：(1)3d和180d大白猪各个组织中RBP4基因都有所表达,其中肝脏表达最高,脂肪组织次之；猪前体脂肪细胞分化的过程中RBP4基因的表达呈先升高后降低再升高的趋势。(2)180d和3d大白猪相比,180日龄大白猪PI3K/Akt信号通路相关基因的表达量降低,与RBP4的表达趋势相反。在脂肪细胞分化的第6、8、10d,PI3K/Akt信号通路相关基因的表达总体呈降低趋势,与RBP4表达呈负相关关系。(3)通过磷酸钙法包装Scramble无关慢病毒和RBP4干扰慢病毒,获得的病毒滴度分别为0.6×106KIU/L、0.6×107KIU/L。RBP4慢病毒侵染猪前体脂肪细胞,细胞中RBP4基因及蛋白的干扰效率达到60%(P<0.01)以上。(4)进一步研究发现在胰岛素刺激情况下,RBP4干扰后可显著提高胰岛素信号通路相关基因mRNA表达和磷酸化蛋白的表达,改善猪脂肪细胞胰岛素抵抗状态,可以在一定程度缓解PI3K/Akt信号通路的抑制作用。总之,RBP4干扰通过上调PI3K/Akt胰岛素信号通路相关因子的表达及其磷酸化水平,提高了胰岛素敏感性。此研究将为胰岛素抵抗相关疾病的治疗提供新思路。

全文目录


摘要  6-7
ABSTRACT  7-11
文献综述  11-23
  第一章 RBP4简介  11-13
  第二章 RBP4与胰岛素抵抗和Ⅱ型糖尿病  13-16
  第三章 PI3K/Akt信号通路与胰岛素抵抗  16-20
    3.1 PI3K/Akt信号通路的概述  16-19
    3.2 PI3K/Akt信号通路与胰岛素抵抗  19-20
  第四章 胰岛素抵抗细胞模型的构建  20-23
    4.1 高胰岛素法  20
    4.2 糖皮质激素法  20-21
    4.3 游离脂肪酸法  21
    4.4 高葡萄糖法  21-22
    4.5 混合法  22-23
试验研究  23-48
  前言  23-24
  第五章 RBP4在猪各组织及原代脂肪细胞分化各阶段的表达规律  24-30
    5.1 试验材料与方法  24-26
      5.1.1 试验动物及样品采集  24
      5.1.2 试验仪器与设备  24
      5.1.3 试验试剂  24
      5.1.4 试验方法  24-26
      5.1.5 数据分析  26
    5.2 试验结果  26-29
      5.2.1 RBP4在3d及180d大白猪各组织中的表达  26-27
      5.2.2 RBP4基因在猪前体脂肪细胞分化各个阶段的时序表达  27-28
      5.2.3 RBP4基因在不同猪脂肪组织中的表达规律  28-29
    5.3 讨论  29-30
  第六章 RBP4与PI3K/Akt信号通路相关基因在猪脂肪细胞和脂肪组织中的表达规律比较  30-33
    6.1 试验材料与方法  30
      6.1.1 试验动物  30
      6.1.2 试验试剂及方法  30
      6.1.3 数据分析  30
    6.2 试验结果  30-32
      6.2.1 3d和180d大白猪背部脂肪组织中RBP4与PDK/Akt信号通路相关基因表达规律的比较  30-31
      6.2.2 猪脂肪细胞分化的第6d、8d和10d RBP4与PI3K/Akt信号通路相关基因表达规律比较  31-32
    6.3 讨论  32-33
  第七章 RBP4慢病毒的包装、滴度及干扰效率的检测  33-40
    7.1 试验材料与方法  33-34
      7.1.1 试验动物  33
      7.1.2 试验试剂  33
      7.1.3 试验方法  33-34
      7.1.4 数据分析  34
    7.2 结果  34-39
      7.2.1 pLentiH1-RBP4 shRNA质粒载体的鉴定  34-35
      7.2.2 pLenti-H1-shRBP4病毒的包装及病毒滴度的测定  35-38
      7.2.3 慢病毒侵染猪原代脂肪细胞和RBP4干扰效率的检测  38-39
    7.3 讨论  39-40
  第八章 干扰猪RBP4对PI3K/Akt通路相关基因表达的影响  40-48
    8.1 试验材料与方法  40-41
      8.1.1 试验动物  40
      8.1.2 实验试剂  40
      8.1.3 实验方法  40-41
      8.1.4 数据分析  41
    8.2 试验结果  41-45
      8.2.1 胰岛素激活及胰岛素抵抗状态下细胞形态学观察  41-42
      8.2.2 干扰RBP4对胰岛素激活及胰岛素抵抗状态下PI3K/Akt信号通路相关基因表达的影响  42-44
      8.2.3 RBP4的干扰可缓解LY294002抑制剂对PI3K/Akt信号通路的影响  44-45
    8.3 讨论  45-48
结论  48
创新点  48
需要进一步解决的问题  48-49
参考文献  49-56
附录  56-59
致谢  59-60
作者简介  60

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中图分类: > 农业科学 > 畜牧、动物医学、狩猎、蚕、蜂 > 动物医学（兽医学） > 各种家畜、家禽、野生动物的疾 > 家畜 > 猪
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