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河南部分地区猪圆环病毒2型的分离鉴定及LH2株对昆明小鼠致病性研究

作　者: 王亚丹
导　师: 崔保安
学　校: 河南农业大学
专　业: 预防兽医学
关键词: 猪圆环病毒2型分离序列分析致病性
分类号: S855.3
类　型: 硕士论文
年　份: 2012年
下　载: 9次
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内容摘要

猪圆环病毒2型(porcine circovirus type2, PCV2)为无囊膜的单股环状DNA病毒,属圆环病毒科(Circoviridae)圆环病毒属(Circovirus)的成员。PCV2是最小的病毒之一。根据PCV的致病性、抗原性及核苷酸序列,PCV可分为PCV1和PCV2两个型,PCV1对猪无致病性,但广泛存在于猪体内,基因组全长为1759bp；PCV2有致病性,基因组全长为1767bp或1768bp。PCV2被认为是仔猪断奶后多系统衰竭综合征(Postweaning multisystemic wasting syndrome, PMWS)、猪皮炎与肾炎综合征(PDNS)、猪呼吸道综合征(PRDC)、繁殖障碍的主要影响因素。2000年从患PMWS的猪中分离到第一株PCV2分离株,之后,PCV2相关疾病在中国迅速蔓延,给我国的养猪业造成了巨大的损失,威胁着养猪业的发展。因此,加强该病及其病原的研究具有重要的意义。利用PCR方法,对河南郑州、南阳、焦作等地采集的疑似PCV2感染的病料进行检测。PCR检测为阳性的病料经处理后,接种无PCV污染的PK-15细胞,盲传6代,用PCR方法仍然能够在接种细胞中检测到PCV2核酸,PRV、PRRSV、PPV、PCV1的PCR检测均为阴性。通过直接免疫荧光试验,观察到了感染病毒的细胞出现了特异性荧光。设计一对引物,扩增出11株分离株的全基因组,分别命名为：LH1、ZZ1、ZZ2、ZZ3、 ZZ4、JZ1、JZ2、LY1、PDS1、JY1、 NY1。与GenBank上已收录的国内外的PCV2序列进行同源性比较和进化树分析。结果表明,11株PCV2中有10株全基因组为1767bp,基因组分型为PCV2b,1株为1768bp,说明PCV2b是河南省PMWS发生的主要因素；11个毒株的同源性位于94.9%～100%之间,和其它毒株的同源性为94.7%～100%；10株基因组为1767bp的毒株处于一大分支上,遗传进化比较稳定。30只6周龄的昆明小鼠被随机分为3组。A组腹腔注射0.2mL/只的PCV2-LH1F10病毒液。B组腹腔注射0.2mL/只的PCV2-LH1F10病毒液,第一次接种后7d再次腹腔注射0.2mL/只的PCV2-LH1F10病毒液加强接种一次。C组腹腔注射0.2mL/只的PBS液作为对照组。每组分别在接种后7、14、28、35和42d处死。剖检每只小鼠。收集血清检测PCV2特异性抗体。收集组织进行组织病理学研究和PCR。PCR结果显示接种病毒的小鼠体内有病毒的复制,组织病理学观察发现接种病毒的小鼠组织有细微的病理损伤,此外,接种小鼠中能产生特异性的PCV2抗体,且明显高于对照组。本研究成功分离出了11株PCV2毒株,并分析了它们与国内外PCV2毒株的同源性,为PCV2在河南地区的分子流行病学、遗传变异及防治奠定了基础。

全文目录

致谢  4-5
目录  5-6
摘要  6-7
文献综述  7-22
引言  22-23
试验一猪圆环病毒2型的分离与鉴定  23-32
  1 材料与方法  23-28
  2 结果与分析  28-30
  3 结论与讨论  30-32
试验二猪圆环病毒2型分离株全基因组的克隆与序列分析  32-41
  1 材料与方法  32-34
  2 结果与分析  34-39
  3 结论与讨论  39-41
试验三猪圆环病毒2型对昆明小鼠致病性研究  41-50
  1 材料与方法  41-44
  2 结果与分析  44-48
  3 结论与讨论  48-50
全文总结  50-51
参考文献  51-59
英文摘要  59-60

河南部分地区猪圆环病毒2型的分离鉴定及LH2株对昆明小鼠致病性研究

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