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白桦BpFLC基因的克隆及遗传转化

作　者: 臧丽娜
导　师: 曲冠证
学　校: 东北林业大学
专　业: 林木遗传育种
关键词: FLC 白桦 基因克隆 遗传转化
分类号: S792.153
类　型: 硕士论文
年　份: 2013年
下　载: 27次
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内容摘要


开花植物从营养生长向生殖生长的转变是由内因和外因共同作用的结果。FLC是抑制花期转变的关键因子,是多种调控途径的作用因子。本文从白桦中分离出FLC基因,命名为BpFLCo对其进行初步研究,主要结果如下：1.从白桦叶片中的cDNA库中分离BpFLC基因,其全长为1304bp,开放读码框为627bp,共编码208个氨基酸,推测其分子量为50.419kD,等电点为5.17。2.通过实时荧光定量PCR的方法,对BpFLC基因在不同器官中的表达模式进行了分析。结果表明,BpFLC基因在不同的组织中均有表达,其中以茎尖和幼叶的表达较高,老叶和根中次之,茎段最低。3.构建了白桦BpFLC基因的亚细胞定位融合蛋白载体GFP-BpFLC,并将此载体转化至洋葱细胞中进行瞬时表达。结果表明,BpFLC基因定位于细胞核和细胞质。4.应用染色体步移技术获得BpFLC基因启动子,其全长为1647bp,具有启动子序列的典型特征,如TATA-box、CAAT-box等,还含有一些重要的与开花相关的功能元件,如：WRKY71OS和GARE。5.构建了植物表达载体pROK Ⅱ-BpFLC,并经农杆菌介导进行白桦遗传转化。通过PCR、Q-PCR、Nouthern杂交鉴定表明,BpFLC基因已经整合到白桦基因组中,且转基因植株的表达量远远高于野生型植株。6.将植物表达载体pROKⅡ-BpFLC用浸花法对拟南芥进行遗传转化。通过PCR、RT-PCR、Nouthern杂交鉴定表明,BpFLC基因已经整合到拟南芥基因组中,并在转录水平正常表达。Q-PCR结果表明,在转基因植株中,某些与开花相关的基因表达量下将,如FT, FD, SOC1和AP1。

全文目录


摘要  3-4
Abstract  4-8
1 绪论  8-18
  1.1 植物的成花途径  8-15
    1.1.1 春化途径  8-10
    1.1.2 自主途径  10-11
    1.1.3 光周期途径  11-13
    1.1.4 赤霉素途径  13-15
  1.2 各种途径的交叉作用  15-16
  1.3 开花抑制因子FLC  16-17
  1.4 本课题的目的及意义  17-18
2 白桦BpFLC基因序列分析及表达特征研究  18-32
  2.1 实验材料  18
    2.1.1 植物材料  18
    2.1.2 菌株与载体  18
    2.1.3 主要试剂  18
    2.1.4 实验仪器  18
  2.2 实验方法  18-25
    2.2.1 白桦BpFLC基因的序列分析  18-19
    2.2.2 白桦BpFLC基因的组织特异性表达  19-20
    2.2.3 白桦BpFLC基因的亚细胞定位  20-23
    2.2.4 白桦BpFLC基因的启动子克隆  23-25
  2.3 结果与分析  25-31
    2.3.1 白桦BpFLC基因的生物信息学分析  25-27
    2.3.2 白桦BpFLC基因的组织特异性表达分析  27-28
    2.3.3 BpFLC基因的亚细胞定位  28-29
    2.3.4 BpFLC基因启动子序列分析  29-31
  2.4 讨论  31-32
3 白桦BpFLC基因转拟南芥及分析  32-47
  3.1 实验材料  32
    3.1.1 植物材料  32
    3.1.2 菌株和载体  32
    3.1.3 主要试剂  32
    3.1.4 实验仪器  32
    3.1.5 Northern blot试剂  32
  3.2 实验方法  32-38
    3.2.1 植物表达载体pROK Ⅱ-BpFLC的构建  32
    3.2.2 液氮冻融法转化根癌农杆菌  32-33
    3.2.3 拟南芥的播种与栽培  33-34
    3.2.4 拟南芥的遗传转化(浸花法)  34
    3.2.5 拟南芥转基因种子的筛选  34-35
    3.2.6 转基因拟南芥分子水平检测  35-37
    3.2.7 开花相关基因的实时荧光定量PCR检测  37-38
    3.2.8 转基因拟南芥石蜡切片的制作  38
  3.3 结果与分析  38-46
    3.3.1 植物表达载体pROK Ⅱ-BpFLC的鉴定  38-39
    3.3.2 农杆菌转化子的鉴定  39
    3.3.3 转基因拟南芥的获得  39-40
    3.3.4 转基因拟南芥分子水平鉴定  40-41
    3.3.5 开花相关基因的实时荧光定量PCR分析  41-42
    3.3.6 转基因拟南芥石蜡切片观察  42-43
    3.3.7 转基因拟南芥的表型观察  43-46
  3.4 讨论  46-47
4 白桦BpFLC基因转白桦及分析  47-52
  4.1 实验材料  47
    4.1.1 植物材料  47
    4.1.2 菌株和载体  47
    4.1.3 主要试剂  47
    4.1.4 实验仪器  47
    4.1.5 主要培养基  47
  4.2 实验方法  47-48
    4.2.1 白桦的遗传转化  47-48
    4.2.2 转基因白桦分子水平检测  48
  4.3 结果与分析  48-51
    4.3.1 转基因白桦的获得  48-49
    4.3.2 转基因白桦分子水平鉴定  49-50
    4.3.3 转基因白桦的培育  50-51
  4.4 讨论  51-52
结论  52-54
参考文献  54-66
攻读学位期间发表的学术论文  66-67
致谢  67-68

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中图分类: > 农业科学 > 林业 > 森林树种 > 阔叶乔木 > 桦木 > 白桦
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