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青蒿素与蒿甲醚对人鼻咽癌（CNE-1）细胞辐射敏感性的影响及作用机制研究

作　者: 潘麓羽
导　师: 曹建平
学　校: 苏州大学
专　业: 放射医学
关键词: 青蒿素 蒿甲醚 辐射增敏作用 CNE-1细胞 微核 染色体突变 细胞周期 wee1 cyclinB1
分类号: R739.63
类　型: 硕士论文
年　份: 2010年
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内容摘要


目的本课题分别研究青蒿素(artemisinin)与蒿甲醚(artemether)对p53突变型人鼻咽癌CNE-1细胞辐射增敏作用及机制;比较青蒿素与蒿甲醚对CNE-1细胞辐射增敏作用的差异性。通过检测青蒿素与蒿甲醚的药物浓度和作用时间对CNE-1细胞的抑制效应,确定用作辐射增敏实验的药物浓度及时间;通过研究青蒿素与蒿甲醚对辐射后CNE-1细胞增殖能力的影响,探讨青蒿素与蒿甲醚对细胞辐射敏感性的影响;通过对青蒿素、蒿甲醚及60Coγ射线作用后细胞周期以及细胞周期调控相关蛋白wee1,cyclinB1表达水平的检测,对青蒿素与蒿甲醚辐射增敏机制进行研究。并且,比较分析青蒿素与蒿甲醚对人鼻咽癌细胞辐射增敏作用及作用机理。方法(1)利用四氮唑盐比色试验(MTT)分别检测青蒿素与蒿甲醚对人鼻咽癌细胞存活分数的影响;(2)应用克隆形成法检测青蒿素与蒿甲醚对细胞辐射敏感性的影响;(3)胞质分裂阻滞微核法(cytokinesis block method,CB法)和常规染色体畸变分析分别研究青蒿素、蒿甲醚对60Coγ射线诱导CNE-1细胞微核率和染色体畸变的影响;(4)利用流式细胞术检测60Coγ射线作用后青蒿素与蒿甲醚对细胞周期的影响;(5)应用Western Blot法观察60Coγ射线作用后青蒿素、蒿甲醚对细胞周期调控相关蛋白wee1,cyclinB1的影响。结果(1)MTT实验显示青蒿素与蒿甲醚对人鼻咽癌细胞的抑制率具有浓度及时间依赖性,其抑制作用随青蒿素与蒿甲醚浓度和作用时间的增加而增加;(2)青蒿素与蒿甲醚对人鼻咽癌细胞的抑制率不同,当人鼻咽癌细胞的抑制率达到10%左右时,青蒿素与蒿甲醚的作用浓度分别为5μmol/L和20μmol/L;(3)在浓度为5μmol/L青蒿素与20μmol/L蒿甲醚的作用下,细胞克隆形成率随照射剂量增加而减少;青蒿素与蒿甲醚对人鼻咽癌CNE-1细胞均具有辐射增敏作用,蒿甲醚较青蒿素对人鼻咽癌CNE-1细胞具有更强的辐射增敏作用;(4)对于CNE-1细胞,单纯照射组和青蒿素+照射组平均致死剂量(D0)分别为5.6Gy、4.4Gy,准阈剂量(Dq)分别为1.33 Gy、0.285 Gy,辐射增敏比(SER)为1.272;单纯照射组和蒿甲醚+照射组平均致死剂量(D0)分别为5.6Gy、3.7Gy,准阈剂量(Dq)分别为1.33 Gy、0.25 Gy,辐射增敏比(SER)为1.481。蒿甲醚的辐射增敏比(SER=1.481)大于青蒿素的辐射增敏比(SER=1.272),同样表明蒿甲醚对人鼻咽癌CNE-1细胞的辐射增敏作用大于青蒿素;(5)微核和染色体分析显示:青蒿素与蒿甲醚均能够提高相同剂量照射诱发的CNE-1细胞的微核率和染色体畸变率;相同剂量照射,蒿甲醚作用后CNE-1细胞的微核率和染色体畸变率均高于青蒿素(P<0.01);(6)流式细胞术检测细胞周期发现,药物+照射组与单纯照射组相比, G0/G1期细胞比例上升(P <0.01),G2/M期细胞比例下降(P <0.01);(7)Western-blot分析,药物+照射组wee1蛋白较单纯照射组减少,cyclinB1蛋白较单纯照射组增加。结论(1)青蒿素与蒿甲醚对人鼻咽癌CNE-1细胞的抑制率随着药物浓度的增加及作用时间的延长而增加;(2)相同浓度的青蒿素对人鼻咽癌细胞的抑制率高于蒿甲醚的抑制率。(3)青蒿素与蒿甲醚对人鼻咽癌CNE-1细胞均具有辐射增敏作用。(4)蒿甲醚较青蒿素对人鼻咽癌CNE-1细胞具有更强的辐射增敏作用。(5)青蒿素与蒿甲醚对CNE-1细胞的辐射增敏作用与其抑制辐射诱导活化的G2/M期阻滞效应使受损细胞没有经过修复直接进入分裂期而发生死亡有关。(6)青蒿素和蒿甲醚主要通过诱导CNE-1细胞中wee1蛋白表达降低和cyclinB1蛋白表达增高,从而减弱辐射诱导的G2/M期阻滞效应,而发挥其辐射增敏作用。

全文目录


中文摘要  4-6
Abstract  6-10
引言  10-13
第一部分 第一部分青蒿素与蒿甲醚对人鼻咽癌CNE-1 细胞的增殖抑制效应  13-20
  材料和方法  13-16
  结果  16-18
  讨论  18-20
第二部分 青蒿素与蒿甲醚对人鼻咽癌CNE-1 细胞辐射增敏作用的对比研究  20-26
  材料和方法  20-22
  结果  22-24
  讨论  24-26
第三部分 青蒿素与蒿甲醚对60Coγ射线照射后人鼻咽癌CNE-1 微核染色体的影响  26-39
  材料和方法  26-28
  结果  28-31
  讨论  31-39
第四部分 青蒿素与蒿甲醚对60Coγ射线照射后人鼻咽癌CNE-1 周期的影响  39-45
  材料和方法  39-40
  结果  40-43
  讨论  43-45
第五部分 青蒿素与蒿甲醚对CNE-1 细胞中wee1、cycli1181 蛋白表达的影响  45-53
  材料和方法  45-48
  结果  48-50
  讨论  50-53
结论  53-54
参考文献  54-59
综述  59-68
  参考文献  65-68
已发表论文及其它  68-69
致谢  69-70

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中图分类: > 医药、卫生 > 肿瘤学 > 耳鼻咽喉肿瘤 > 咽肿瘤
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