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江苏地区猪圆环病毒2型的分离鉴定和嵌合型PCV1-2 206佐剂灭活苗对商品猪的免疫保护研究

作　者: 汪正亮
导　师: 高崧
学　校: 扬州大学
专　业: 微生物学
关键词: 猪圆环病毒2型分离鉴定嵌合型PCV1-2灭活苗 206佐剂荧光定量PCR 免疫保护
分类号: S852.651
类　型: 硕士论文
年　份: 2013年
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内容摘要

猪圆环病毒2型(porcine circovirus type2, PCV2)是引起猪圆环病毒病(porcine circovirus associated diseases, PCVAD)的主要病原,是继猪繁殖与呼吸综合征(porcine reproductive and respiratory syndrome, PRRS)之后发现的又一重要疫病。自1997年Clark等首次分离到PCV2以来,该病已给世界养猪业造成了巨大的经济损失。在2008年第20届国际猪病大会(The20th International Pig Veterinary Society Congress,20th IPVS)上,曾将其列为危害养猪业发展的头号疫病。我国自2000年郎洪武首次报道猪群中存在PCV2抗体以来,各地陆续报道,表明感染范围已波及全国。本文旨在检测江苏部分猪场PCV2的流行情况,为PCV2相关疾病的防制提供参考。同时,用本实验室构建的嵌合型猪圆环病毒1-2型DNA克隆电转染Dulac细胞,获得嵌合型PCV1-2病毒。将该病毒灭活后以206佐剂乳化制备灭活苗免疫无PCV2母源抗体的商品猪,并对免疫猪攻击PCV2。通过对免疫攻毒猪的相关指标进行观察、分析,以评价该灭活疫苗对于预防PCV2感染的有效性。1猪圆环病毒2型的分离鉴定在扬州某规模化屠宰场(屠宰猪来自江苏部分地区)进行采样,通过PCR方法检测样品中PCV2的DNA。阳性样品作PCV2的分离,对分离到的5株PCV2进行全序列测定。对全基因组进行测序后发现,分离到的5个PCV2分离株的基因组全长均为1767bp,ORF2序列全长为705bp。5个分离株之间的DNA序列同源性高,为99.6～99.7%。系统发生树显示5个分离株均属PCV2group1亚型,即PCV2b。其亲缘关系近,属进化树的同一个微小分支。广东分离株group1C和荷兰分离株group1C与它们的同源性最为接近,同属于一个大的分支。流行病学调查表明,PCV2group1即PCV2b已成为目前江苏地区流行的优势毒株。为研究本地区PCV2的遗传和变异,探索PCV2的遗传进化关系等提供了材料。2嵌合型PCV1-2病毒灭活苗对商品猪感染PCV2免疫保护效力的研究本文运用多功能细胞电穿孔仪将本实验室构建的嵌合型猪圆环病毒1-2型DNA克隆转染Dulac细胞,传代培养后收获嵌合型猪圆环病毒PCV1-2。将该重组病毒灭活后与206佐剂乳化制成灭活苗,免疫42日龄的PCV2母源抗体阴性商品猪,一免后21天加强免疫一次,第二次免疫后14天攻击PCV2毒株。结果表明,二免后14天,所有免疫组试验猪都表现为血清学阳性,可检测到高滴度的PCV2特异荧光抗体,且中和抗体效价水平在1/15-1/20。攻毒后21天扑杀试验猪并剖检,免疫组猪的淋巴结和各脏器的大体和显微病变都比攻毒对照组轻微。攻毒对照组猪的淋巴结出现多核巨细胞和嗜酸性粒细胞,且有大量的淋巴细胞缺失,免疫组未见多核巨细胞,淋巴细胞缺失也少见。荧光定量PCR测得腹股沟淋巴结中PCV2病毒载量在攻毒对照组为5.566±0.432,在104.0TCID50、105.0TCID50、106.0TCID50免疫组分别为4.469±1.023、4.434±0.716、3.521±0.958,其中105.0TCID50、106.0TCID50免疫组与攻毒对照组差异显著(P<0.05)。综上所述,嵌合型猪圆环病毒PCV1-2灭活苗可以有效地诱导免疫猪产生针对PCV2感染的保护性免疫应答。

全文目录

摘要  3-5
Abstract  5-8
符号说明  8-9
综述  9-18
  1. PCV病原学  9-10
  2. 与PCV2相关的疾病  10-11
  3. PCV2的实验室诊断  11-12
  4. PCV2的致病机制  12-14
  5. PCV2的流行病学  14-15
  6. PCV2的防制  15-16
  7. 研究的目的及意义  16-18
第一章猪圆环病毒2型的分离与鉴定  18-30
  摘要  18
  1 材料  18-20
  2 方法  20-24
  3 结果  24-29
  4 讨论  29-30
第二章嵌合型PCV1-2病毒灭活苗对商品猪感染PCV2免疫保护效力的研究  30-50
  摘要  30-31
  1 材料  31-32
  2 方法  32-37
  3 结果  37-48
  4. 讨论  48-50
全文小结  50-51
参考文献  51-58
致谢  58-59

江苏地区猪圆环病毒2型的分离鉴定和嵌合型PCV1-2 206佐剂灭活苗对商品猪的免疫保护研究

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