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产抑制革兰氏阴性菌细菌素菌株的筛选鉴定及植物乳杆菌素LPC818的纯化

作　者: 陈一然
导　师: 张明
学　校: 安徽农业大学
专　业: 微生物学
关键词: 植物乳杆菌 植物乳杆菌素 筛选 特性 纯化
分类号: Q93
类　型: 硕士论文
年　份: 2011年
下　载: 20次
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内容摘要


植物乳杆菌产生的细菌素不仅种类多，其菌株可产生良好的保健功效，因此成为研究的热点之一。为获得产细菌素的优良菌株，本文从多种植物源材料中筛选出4株产细菌素的菌株，并对各菌株进行了分类鉴定。在此基础之上，对植物乳杆菌LPC818产生的具广谱抑菌作用的细菌素plantaricin LPC818，进行了较为深入的研究。具体研究结果如下：1.从多种植物源材料中筛选到4株产细菌素菌株，经生理生化特性和16SrRNA基因序列的同源性分析鉴定，其中3株菌为植物乳杆菌（Lactobacillusplantarum），1株为亚利桑纳乳杆菌（Lactobacillus arizonensis）；2. plantaricin LPC818对酸有一定的依赖性，在pH3~5.5时，具有抑菌活性；plantaricin LPC818的热稳定性较好，经100℃处理30min抑菌活力仍保持在80%以上；plantaricin LPC818对蛋白酶E、蛋白酶K和脂肪酶敏感，对糜蛋白酶和木瓜蛋白酶部分敏感，表明plantaricin LPC818为脂蛋白类物质；3. plantaricin LPC818的抑菌谱较广，对多种革兰氏阳性菌和革兰氏阴性菌有较强的抑菌作用。以鸡白痢沙门氏菌为指示菌，确定了plantaricin LPC818的作用方式为杀菌；4.经60%饱和度的硫酸铵沉淀、Sephadex G-25凝胶层析和反向HPLC三步纯化，plantaricin LPC818的纯化倍数为7.87，得率为0.8%；通过蛋白质电泳及ESI-MS跟踪检测，推断出plantaricin LPC818的分子量为745.10Da。

全文目录


摘要  3-4
Abstract  4-5
目录  5-7
文献综述  7-14
  1 细菌素  7-8
    1.1 细菌素的定义及分类  7
    1.2 细菌素的纯化  7-8
  2. 植物乳杆菌素  8-14
    2.1 Class I 植物乳杆菌素  9-10
    2.2 Class II 植物乳杆菌素  10-11
    2.3 其他植物乳杆菌素  11-12
    2.4 植物乳杆菌素的应用  12-14
1 引言  14-15
2 材料与方法  15-29
  2.1 实验材料  15-20
    2.1.1 样品来源  15
    2.1.2 菌株  15-16
    2.1.3 培养基  16-17
    2.1.4 主要试剂与药品  17-18
    2.1.5 主要仪器与设备  18
    2.1.6 主要溶液的配制  18-20
  2.2 实验方法  20-29
    2.2.1 产抑制革兰氏阴性菌细菌素菌株的筛选  20-21
    2.2.2 菌种的鉴定  21-25
    2.2.3 细菌素 plantaricin LPC818 的生物学特性  25-26
    2.2.4 细菌素 plantaricin LPC818 的分离纯化  26-29
3 结果与分析  29-42
  3.1 产细菌素菌株的分离、筛选与确定  29-30
    3.1.1 乳酸菌的分离  29
    3.1.2 产抑菌物质菌株的筛选  29
    3.1.3 产细菌素菌株的筛选  29
    3.1.4 产细菌素菌株的确定  29-30
  3.2 菌株的鉴定  30-33
    3.2.1 菌落特征  30
    3.2.2 菌体特征  30-31
    3.2.3 菌株的生理生化特征  31-32
    3.2.4 16S rRNA 基因序列分析及系统进化树的构建  32-33
  3.3 细菌素 plantaricin LPC818 生物学特性  33-37
    3.3.1 细菌素的 pH 活性范围  33-34
    3.3.2 细菌素的热稳定性  34
    3.3.3 细菌素对酶的敏感性  34-35
    3.3.4 细菌素抑菌谱的测定  35-36
    3.3.5 细菌素的作用方式  36-37
  3.4 细菌素 plantaricin LPC818 的分离纯化  37-42
    3.4.1 Lowery 法测蛋白浓度标准曲线  37
    3.4.2 Sephadex G-25 凝胶层析  37-38
    3.4.3 RP-HPLC  38-40
    3.4.4 plantaricin LPC818 纯化效果的分析  40
    3.4.5 plantaricin LPC818 分子量的初步确定  40-42
4 讨论  42-44
5 结论  44-45
参考文献  45-50
致谢  50-51
个人简介  51
攻读硕士期间的研究成果  51-52
附录  52-54

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中图分类: > 生物科学 > 微生物学
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