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地塞米松诱导乳腺癌细胞对紫杉醇耐药的作用及机制研究

作　者: 丁凌雁
导　师: 康马飞
学　校: 桂林医学院
专　业: 内科学
关键词: 地塞米松乳腺癌细胞株紫杉醇耐药 MKP-1
分类号: R737.9
类　型: 硕士论文
年　份: 2011年
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内容摘要

目的:观察不同浓度地塞米松(DEX)预处理人乳腺腺癌细胞MCF-7后再予紫杉醇(PTX)干预,MCF-7细胞耐药发生率及细胞中分裂素活化蛋白激酶磷酸酯酶-1(MKP-1)mRNA表达的变化。探讨糖皮质激素与化疗耐药关系及糖皮质激素诱导化疗耐药的可能机制。方法: 1.四甲基偶氮唑盐(MTT)法筛选紫杉醇对MCF-7细胞的IC50浓度MCF-7细胞常规培养接种于96孔板,设置调零孔(完全培养液),对照孔(细胞、完全培养液),实验孔(细胞、完全培养液),培养24h后,实验孔加入不同浓度的紫杉醇干预,紫杉醇的终浓度分别设置为0.7μmol/L、7μmol/L、70μmol/L,对照孔加入等体积的PBS液,继续培养24 h,MTT法测定紫杉醇预处理的MCF-7细胞的存活率,筛选紫杉醇的IC50浓度。2. MTT法测定地塞米松诱导MCF-7细胞对紫杉醇的反应及RT-PCR法检测细胞中MKP-1 mRNA的表达水平MCF-7细胞常规培养分别接种于96孔板和24孔板,设置调零孔(完全培养液),对照孔(细胞、完全培养液),实验孔(细胞、地塞米松、完全培养液),其中地塞米松终浓度分别设置为0.1μmol/L、1μmol/L、10μmol/L,培养24h后,于对照组及实验孔加入紫杉醇浓度分别为0 mol/L、1倍IC50、2倍IC50,继续培养24 h,MTT法测定细胞存活率及RT-PCR法检测细胞中MKP-1 mRNA的表达水平。结果:1.不同浓度(0.7μmol/L、7μmol/L、70μmol/L)紫杉醇处理MCF-7细胞后,细胞的抑制率分别为36.7%、53.7%、76.2%,其IC50浓度为5.0μmol/L。2.不同浓度的地塞米松预处理MCF-7细胞后使用紫杉醇治疗,产生耐药,耐药率随着地塞米松浓度的增加而增加:(1)紫杉醇浓度为0μmol/L,地塞米松浓度为0μmol/L(对照孔,下同),0.1μmol/L,1μmol/L,10μmol/L时,细胞存活率分别为72.6%,88%,93.2%,99.9%(F=68.6,组内各组间P<0.05);(2)紫杉醇浓度为5μmol/L,地塞米松浓度为0μmol/L,0.1μmol/L,1μmol/L,10μmol/L时,细胞存活率分别为50.1%,60.8%,68.2%,87%(F=137.735,组内各组间P<0.01);(3)紫杉醇浓度为10μmol/L,地塞米松浓度为0μmol/L,0.1μmol/L,1μmol/L,10μmol/L时,细胞存活率分别为40.7%,43.9%,50.3%,61.5%(F=57.275,DEX浓度为0,0.1μmol/L比较,P<0.05,余组内各组间P<0.01)。3.MKP-1 mRNA的表达水平随着地塞米松浓度的增加而增加:(1)紫杉醇浓度为0μmol/L,地塞米松浓度为0μmol/L,0.1μmol/L,1μmol/L,10μmol/L时,细胞MKP-1mRNA的表达分别为0.017±0.003,0.043±0.005,0.168±0.012,0.358±0.014(F=791.836,组内各组间P<0.05);(2)紫杉醇浓度为5μmol/L,地塞米松浓度为0μmol/L,0.1μmol/L,1μmol/L,10μmol/L时,细胞MKP-1mRNA的表达分别为0.063±0.006,0.393±0.028,0.512±0.022,0.851±0.039(F=461.737,组内各组间P<0.01);(3)紫杉醇浓度为10μmol/L,地塞米松浓度为0μmol/L,0.1μmol/L,1μmol/L,10μmol/L时,细胞MKP-1mRNA的表达分别为0.035±0.004,0.109±0.016,0.156±0.027,0.318±0.025(F=108.778,组内各组间P<0.05)。结论:地塞米松能诱导MCF-7细胞对紫杉醇产生耐药,MKP-1过度表达可能是其中机制之一。

全文目录

中文摘要  6-9
ABSTRACT  9-13
英汉缩略词对照表  13-15
前言  15-18
第一部分地塞米松诱导乳腺癌细胞对紫杉醇耐药作用的研究  18-33
  1 材料与方法  18-22
    1.1 细胞系  18
    1.2 药物  18
    1.3 试剂  18
    1.4 仪器  18
    1.5 方法  18-21
      1.5.1 细胞复苏与培养  18-19
      1.5.2 细胞冻存  19
      1.5.3 MTT 法测定紫杉醇对MCF-7 细胞的半数抑制率（IC50）  19-20
      1.5.4 MTT 法测定地塞米松诱导MCF-7 细胞对紫杉醇的反应  20-21
    1.6 统计学处理  21-22
  2 结果  22-33
    2.1 紫杉醇对MCF-7 细胞的半数抑制率（IC50）  22
    2.2 地塞米松诱导 MCF-7 细胞对紫杉醇的反应  22-33
第二部分地塞米松诱导乳腺癌细胞对紫杉醇耐机制的研究  33-56
  1 材料与方法  33-39
    1.1 细胞系  33
    1.2 药物  33
    1.3 试剂  33
    1.4 仪器  33
    1.5 方法  33-39
      1.5.1 细胞复苏与培养  33-34
      1.5.2 细胞冻存  34
      1.5.3 RT-PCR 法检测细胞中MKP-1 mRNA 的表达水平  34-39
        1.5.3.1 引物的设计  35
        1.5.3.2 试剂的制备  35
        1.5.3.3 细胞处理  35-36
        1.5.3.4 提取总 RNA  36-37
        1.5.3.5 逆转录聚合酶链式反应  37-38
        1.5.3.6 琼脂糖凝胶电泳  38
        1.5.3.7 图像分析  38-39
    1.6 统计学处理  39
  2 结果  39-47
  3 讨论  47-55
    3.1 地塞米松与化疗耐药的关系  47-48
    3.2 地塞米松与MKP-1mRNA表达的关系  48-54
    3.3 小结  54-55
  4 结论  55-56
参考文献  56-64
综述  64-76
  参考文献  71-76
攻读学位期间发表的学术论文目录  76-77
致谢  77

地塞米松诱导乳腺癌细胞对紫杉醇耐药的作用及机制研究

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