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阿魏酸钠对幼大鼠心肌柔红霉素损伤的保护效应及其机制

作　者: 连加辨
导　师: 方秋娟; 吴枝娟
学　校: 福建医科大学
专　业: 生理学
关键词: 柔红霉素阿魏酸钠大鼠未成熟心肌心肌细胞心肌保护
分类号: R96
类　型: 硕士论文
年　份: 2013年
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内容摘要

目的探讨阿魏酸钠(SF)对柔红霉素(DNR)损伤心肌的保护效应，并探讨其机制。方法【体内】雄性SD大鼠，222日龄，体重60～80g，70只随机分7组（n=10）。正常对照组(Control)、模型组(DNR)、不同剂量（12.5、25、50、100、200mg/Kg）SF干预组。Control组,大鼠腹腔注射生理盐水（NS，5ml/Kg），每周1次，共5次；DNR组、不同剂量SF干预组，5次腹腔注射均为DNR （2.5mg/Kg）。其中Control组、DNR组自第1次注射DNR开始腹腔注射NS(5ml/kg.d),不同剂量SF干预组分别腹腔注射不同剂量（12.5、25、50、100、200mg/kg.d）SF，均连续30d。各组大鼠在末次给药后第5d，取血浆测LDH和CK含量、描记分析大鼠体表心电图、左心室插管测大鼠左心室血流动力学指标（HR、LVSP、LVDP、+dp/dtmax和–dp/dtmax），取心肌组织测SOD和MDA含量、HE染色观察心肌组织学结构、电镜检测心肌细胞超微结构；TUNEL法检测心肌细胞凋亡；Real-time PCR检测心肌cTnI、CaM、LTCc(1aC)、SERCA2、RyR2、、Caspase9和Caspase3基因表达；免疫印迹检测心肌β-Tubulin、CaM、cTnI蛋白表达和线粒体Cyt-c释放。【体外】采用H9C2大鼠心肌细胞株柔红霉素（DNR）1μ M处理24h，建立心肌细胞DNR损伤体外实验模型。MTT法检测细胞存活率，检测心肌细胞培养上清LDH和CK含量，流式细胞术检测心肌细胞凋亡率，DCF-DA荧光试剂法检测心肌细胞内活性氧（ROS）的含量，Flou-3荧光试剂法检测心肌细胞[Ca2+]i含量，Real-time PCR检测心肌细胞cTnI、CaM、LTCc(1aC)、SERCA2、RyR2、Caspase9和Caspase3基因表达，免疫印迹检测心肌细胞β-Tubulin、CaM、cTnI、p38MAPK、细胞核NF-κ B蛋白表达和线粒体Cyt-c释放。结果【体内】幼大鼠腹腔注射DNR5次累积剂量12.5mg/kg造成幼大鼠心肌DNR损伤，表现为大鼠一般状态差、体重不增、甚至死亡，心肌酶外漏，体表心电图非特异性改变，左心室收缩舒张功能下降，心肌组织和心肌细胞超微结构损伤，心肌细胞凋亡，心肌组织MDA升高、SOD降低，心肌cTnI、CaM、LTCc(1aC)、SERCA2、RyR2、Caspase9和Caspase3基因表达、心肌β-Tubulin、CaM、cTnI蛋白表达改变，线粒体Cyt-c释放增加。SF干预呈剂量相关性地保护幼大鼠心肌减轻DNR损伤。【体外】H9C2大鼠心肌细胞DNR1μ M作用24h造成心肌细胞DNR损伤，表现为心肌细胞存活率降低，细胞培养上清LDH和CK含量增高，细胞凋亡率升高，细胞内ROS、[Ca2+]i升高，cTnI、CaM、LTCc(1aC)、SERCA2、RyR2、Caspase9和Caspase3基因表达、β-Tubulin、CaM、cTnI、p38MAPK、细胞核NF-κ B蛋白表达改变，线粒体Cyt-c释放增加。SF(15.625～62.5Μm)与1μ M DNR共孵育H9C2大鼠心肌细胞24h，SF呈剂量相关性地保护心肌细胞减轻DNR损伤。结论1、幼大鼠腹腔注射DNR累积剂量12.5mg/kg可制备幼大鼠在体心肌DNR损伤模型；H9C2大鼠心肌细胞1uM DNR处理24h可制备离体心肌细胞DNR损伤模型。2、阿魏酸钠可剂量依赖性地保护DNR损伤的幼大鼠心肌代谢、功能和结构。3、阿魏酸钠对柔红霉素损伤心肌保护作用的可能机制：减轻心肌氧化应激和钙超载，抑制CaM、P38MAPK蛋白和NF-κ B蛋白等活化引起的心肌损伤；调节心肌收缩和舒张相关的蛋白基因表达改善心功能；减少线粒体途径诱导的心肌细胞凋亡等。

全文目录

英文缩略词  4-6
中文摘要  6-8
英文摘要  8-11
前言  11-14
材料  14-16
方法  16-31
结果  31-53
讨论  53-59
结论  59-60
参考文献  60-63
致谢  63-64
综述  64-71
  参考文献  68-71
附录  71-74

阿魏酸钠对幼大鼠心肌柔红霉素损伤的保护效应及其机制

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