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尿激酶纤溶酶原激活物（uPA）抑制剂的设计合成及其酶抑制活性研究

作　者: 白国良
导　师: 杨立泉; 杨潇骁
学　校: 吉林大学
专　业: 微生物与生化药学
关键词: 酶活性环肽抑制剂拟肽发色底物
分类号: R914.4
类　型: 硕士论文
年　份: 2013年
下　载: 23次
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内容摘要

恶性肿瘤的发生发展是一个多步骤、多阶段的过程，而具有侵袭和转移生物学特性是恶性肿瘤区别于良性肿瘤的最重要特征。大量研究发现尿激酶纤溶酶原激活物(urokinase-type plasminogen activator，uPA)系统(uPAS)是多条与肿瘤增殖、侵袭转移相关的正反馈信号通路的始发环节以及执行者，并且已经被证明是一个非常具有前景的抗肿瘤药物靶点。uPAS包括uPA，uPA同源受体(uPAR)及两种内源性的uPA特异性抑制剂(PAI-1及PAI-2)，而作用于uPAS的抗肿瘤药物研究已成为抗肿瘤药物研发的一个新的热点，其中uPA特异性酶抑制剂是开展最早、研究最为深入且取得了有价值的成果的研究方向之一。本论文主要以upain-1cyclo[-CSWRGLENHRMC-]，通过系列衍生化分别得到相应的新颖环肽和拟肽化合物，然后通过发色底物法对衍生化的目标产物进行酶抑制活性的初步研究。论文共分为两部分，第一部分主要介绍uPA抑制剂分类及其研究进展以及uPA抑制剂的优点和作用机制，表明本课题研究的目的和意义。第二部分主要介绍uPA抑制剂的设计、合成及其相应的初步酶抑制活性研究结果。我们以环肽uPA抑制剂upain-1为先导化合物，采用固相和液相合成相结合的方法，通过局部残基位点替换的方式设计合成了10个环肽化合物；以upain-1结构中与uPA酶催化位点相结合的4肽片段为先导化合物设计合成得到了4个简化寡肽化合物。采用发色底物法，以阿米洛利作为阳性对照，对合成的14个目标化合物进行了单一浓度（200M）的体外uPA酶抑制活性筛选，结果发现其中7个环肽化合物具有一定抑制活性；紧接着对这7个化合物进行了IC50和Ki的测定。

全文目录

摘要  4-5
Abstract  5-11
第一章绪论  11-23
  1.1 肿瘤侵袭和转移机制  11-12
  1.2 uPA 系统的概述  12-15
    1.2.1 uPA 简述  12-14
    1.2.2 uPAR  14
    1.2.3 PAI-1 和 PAI-2  14-15
  1.3 uPAS 和肿瘤侵袭转移的关系  15-16
  1.4 uPAS 与肿瘤血管生成的关系  16
  1.5 uPA 抑制剂的研究进展  16-21
    1.5.1 非肽类 uPA 抑制剂  17-19
    1.5.2 多肽类 uPA 合成抑制剂  19-21
    1.5.3 其他类型的抑制剂  21
  1.6 课题研究的内容及意义  21-23
第二章 uPA 抑制剂的设计  23-27
  2.1 环肽 uPA 抑制剂的设计  23-25
    2.1.1 环肽 uPA 抑制剂的改造  23-25
    2.1.2 环肽 uPA 抑制剂的氧化成环  25
  2.2 酶活性试验设计  25-27
第三章实验结果与讨论  27-43
  3.1 缩合方法的优缺点  27-30
    3.1.1 液相多肽合成方法  27
    3.1.2 固相多肽合成方法  27
    3.1.3 微波辅助固相合成的机理  27-28
    3.1.4 Nα-的 Boc 保护及脱除  28-29
    3.1.5 Boc-AA-OH 的 Pac 酯化  29
    3.1.6 缩合方法的选择  29-30
  3.2 酶发色底物合成  30-34
    3.2.1 linker 的合成  32-34
  3.3 环肽的合成  34-38
    3.3.1 合成策略和树脂的选择  34
    3.3.2 树脂的上载以及取代度的测定  34-35
    3.3.3 困难片段的合成  35-36
    3.3.4 二硫键氧化成环  36-38
  3.4 药理活性评价  38-43
    3.4.1 uPA 酶抑制活性实验  38-40
    3.4.2 其它丝氨酸蛋白酶抑制率选择性实验  40-43
第四章 uPA 抑制剂的合成  43-71
  4.1 试剂及试剂处理  43
  4.2 仪器与试剂  43-44
  4.3 常用试剂及试剂的制备  44-45
    4.3.1 饱和 HCl/HOAc  44
    4.3.2 饱和 HCl/EtOAc  44
    4.3.3 茚三酮反应  44
    4.3.4 Ellman 试剂的检测  44-45
  4.4 合成实验方法  45-48
    4.4.1 液相法合成肽的常用方法  45-47
    4.4.2 固相合成肽的方法  47-48
    4.4.3 微波辅助固相肽逐步缩合方法  48
  4.5 uPA 抑制剂的合成  48-67
    4.5.1 酶发色底物的合成  48-53
    4.5.2 环肽 uPA 抑制剂的合成  53-67
  4.6 酶抑制活性实验  67-71
    4.6.1 实验材料  67-68
    4.6.2 实验步骤  68-71
小结  71-73
参考文献  73-83
附录  83-117
作者简介及科研成果  117-119
致谢  119

尿激酶纤溶酶原激活物（uPA）抑制剂的设计合成及其酶抑制活性研究

内容摘要

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