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~(60)Coγ射线照射大鼠涎腺组织后Mrell蛋白表达及涎腺放射敏感性的实验研究

作　者: 沈洁
导　师: 王代友
学　校: 广西医科大学
专　业: 口腔颌面外科学
关键词: Mre11蛋白大鼠涎腺细胞放射敏感性 DNA双链断裂
分类号: R818
类　型: 硕士论文
年　份: 2012年
下　载: 6次
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内容摘要

目的：大鼠腮腺和颌下腺腺泡细胞经6Gy、9Gy、12Gy、15Gy等单次不同剂量60Coγ射线照射后2h各组Mre11基因及蛋白表达与未照射组比较,观察射线照射对不同类型涎腺上皮细胞Mre11基因及蛋白的表达变化,检测Mre11在正常不同类型涎腺上皮细胞中的定位分布；从基因和蛋白水平探讨大鼠涎腺细胞经照射后Mre11基因及其蛋白的表达改变。方法：选取近交系雄性Wistar大鼠60只,采用完全随机数字法按单次照射0Gy、3Gy、6Gy、9Gy、12Gy、15Gy剂量分成6组、每组10只。以60Coγ射线为放射源,头颈部为放射野,其他部位受铅块保护,采用分割照射法,模拟人体照射的方法。照射后2h收集大鼠两侧腮腺和颌下腺组织。用RT-PCR技术检测不同类型涎腺上皮细胞Mre11mRNA表达情况,以Mre11/β-actin进行Mre11基因表达水平半定量分析。用免疫组化法检测Mre11亚单位的蛋白表达分布,并采用Image-Pro Plus5.0软件分析测定各组的平均光密度值(mOD)。用透射电镜观察不同类型涎腺上皮细胞超微结构变化。结果:RT-PCR检测大鼠涎腺腺泡细胞分别经OGy、3Gy、6Gy、9Gy、12Gy、15Gy照射后2小时Mre11mRNA半定量灰度值经单因素方差分析,P值分别为0.776(P>0.05)和0.954(P>0.05),差异无统计学意义,即各组之间Mre11mRNA表达无统计学差异。免疫组化法检测大鼠涎腺组织经3Gy、6Gy、9Gy、12Gy、15Gy等不同剂量辐射后,各剂量组Mre11蛋白表达强度由平均光密度值(mOD)表示,经单因素方差分析(one way ANOVA),腮腺和颌下腺组内比较P<0.05,Mrell蛋白表达差异有统计学意义。并且可观察到腮腺和颌下腺Mre11蛋白的表达都是随着剂量的增加先增强后又逐渐减弱,腮腺中Mrell蛋白表达强度在9Gy时达到最强,其余组表达强度与未照射组水平接近,颌下腺在6Gy时表达最强。透射电镜观察随着剂量的增加,大鼠腮腺腺泡细胞胞质肿胀、空泡变性和坏死明显加重,间质血管充血、肿胀及变性逐渐加剧,未见到再生、恢复的变化。结论：治疗剂量的60Co,Y照射对正常涎腺组织有损伤,主要作用于腺泡细胞和间质血管,损伤的程度具有剂量依赖性,呈不可逆的损伤。大鼠涎腺细胞Mre11蛋白的表达与辐射剂量以及组织类型有关,腮腺的敏感性较颌下腺强,随剂量的增加先增强后减弱。Mre11mRNA的表达与照射剂量递增无相关性。

全文目录

中英文縮略词  5-6
摘要  6-8
ABSTRACT  8-10
前言  10-12
材料和方法  12-20
  1 材料  12-14
  2 方法  14-20
结果  20-28
  1 免疫组化法实验结果  20-22
  2 RT-PCR实验结果  22-24
  3 透射电镜观察结果  24-26
  4 HE染色实验结果  26-28
讨论  28-34
结论  34-35
参考文献  35-41
综述  41-50
  1 Mre11的简介  41-42
  2 Mre11与疾病  42-43
  3 Mre11在DNA双链损伤修复中的作用  43-44
  4 Mre11核酸外切酶活性  44
  5 Mre11下调对整个复合物稳定性的影响  44-45
  6 Mre11与放射增敏  45-46
  7 维持基因组的稳定性  46
  8 Mre11基因的展望  46-48
  参考文献  48-50
致谢  50-51
附录发表论文  51

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