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高眼压大鼠外周血内皮祖细胞数量变化及辛伐他汀干预作用

作　者: 赵青
导　师: 颜华
学　校: 天津医科大学
专　业: 眼科学
关键词: 高眼压模型内皮祖细胞 Bcl-2/Bax 细胞凋亡辛伐他汀
分类号: R779.6
类　型: 硕士论文
年　份: 2012年
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内容摘要

目的：1.建立大鼠高眼压模型,研究高眼压大鼠视网膜细胞凋亡随病程发展的变化情况。2.研究高眼压大鼠外周血内皮祖细胞(endothelial progenitor cells, EPCs)数量随病程发展变化。3.探讨高眼压大鼠辛伐他汀干预对视网膜细胞凋亡及外周血EPCs的影响,探讨其对视网膜改善作用,为高眼压视神经保护提供理论依据。方法：1.3月龄雄性Wistar大鼠,体重220-250g,共150只,随机分为①正常对照组20只,②高眼压组100只,③激光组30只。高眼压组大鼠采用光凝角巩膜缘静脉及巩膜上静脉方法建立大鼠高眼压模型,根据其病程不同将其分为5个亚组,即高眼压3天、7天、3周、2月、3月组。激光组大鼠采用光凝静脉外侧,避免光凝血管壁建立大鼠激光组模型。根据激光干预后时间长短分为3个亚组,即激光3天、7天、3周组。测定5个亚组及激光组3个亚组大鼠外周血EPCs数量。HE染色观察高眼压组大鼠视网膜各层结构,末端脱氧核糖核酸转移酶介导的dUTP缺口末端标记法(TUNEL)检测视网膜凋亡细胞,免疫组织化学法测定视网膜Bcl-2/Bax水平。2.高眼压组大鼠100只,随机选取30只,予辛伐他汀以20mg/kg每日灌胃给药,连续灌21日作为干预组,予20只生理盐水灌胃作为空白对照组,余50只高眼压大鼠不服用任何药物,作为高眼压阳性对照组。干预组根据其病程长短分别分为3个亚组,即干预组3天、7天、3周组。测定3个亚组外周血EPCs数量。HE染色观察干预组3周组大鼠视网膜各层结构,以TUNEL法检测视网膜凋亡细胞,免疫组织化学法测定视网膜Bcl-2/Bax水平。结果：1.眼压3天时达到高峰,后逐渐缓慢下降,但仍高于正常8mmHg以上,维持3月以上。激光组3天也达高峰,后缓慢下降。外周血EPCs数量3天达高峰,后缓慢降低,高眼压组比激光组下降更明显(p<0.05)。2.高眼压大鼠视网膜HE染色和正常对照组相比,高眼压3天、7天、3周各亚组大鼠视网膜形态未见明显差异；高眼压2月时,视网膜各层明显变薄以外核层最为显著,神经节细胞数量显著减少；高眼压3个月时可见视网膜变薄进一步加重,外核层更薄,神经节细胞数量更少,排列更加紊乱。3.免疫组化高眼压大鼠Bcl-2/Bax阳性细胞比例和正常对照组相比,Bcl-2阳性细胞高眼压3天、7天、3周亚组未见明显差异(p>0.05),高眼压2月、3月亚组阳性细胞比例明显增高(p<0.05);Bax阳性细胞高眼压3天、7天亚组未见明显差异(p>0.05),高眼压3周、2月、3月亚组阳性细胞比例明显增高(p<0.05)。高眼压大鼠TUNEL阳性细胞比例随病程逐渐增高。4.干预组大鼠与高眼压组相比,眼压未见明显差异(p>0.05)。外周血EPCs数量3天达高峰,后缓慢降低,3天时高于高眼压组(p<0.05),3周时也高于高眼压组(p<0.05)。HE染色视网膜各层形态稍整齐；Bcl-2阳性细胞数未见明显差异(p0.05)。Bax阳性细胞比例降低,TUNEL阳性细胞比例明显降低。结论：1.通过光凝角巩膜缘静脉及巩膜上静脉方法可成功建立大鼠高眼压模型,高眼压早期外周血EPCs数量达高峰,后缓慢降低。外周血EPCs数量高眼压与激光组早期相比有统计学差异。2.随高眼压病程延长视网膜感光细胞凋亡数量逐渐增多,神经节细胞明显减少。3.辛伐他汀干预可以提高高眼压早期外周血EPCs数量,使凋亡细胞数量减少,神经节细胞剩余数量增多,可能对模型大鼠视网膜各层细胞有一定保护作用。

全文目录

中文摘要  3-5
Abstract  5-9
缩略语/符号说明  9-10
前言  10-12
  研究现状、成果  10-11
  研究目的、方法  11-12
一、高眼压大鼠外周血EPCs数量变化及视网膜病理变化  12-30
  1.1 对象和方法  12-18
    1.1.1 实验动物、主要仪器和实验试剂  12-13
    1.1.2 主要试剂、液体配制  13
    1.1.3 实验方法  13-18
    1.1.4 统计学分析  18
  1.2 结果  18-26
    1.2.1 模型大鼠眼压测量  18-20
    1.2.2 模型大鼠外周血EPCs数量  20-22
    1.2.3 模型大鼠视网膜组织HE染色结果  22-23
    1.2.4 模型大鼠视网膜组织免疫组化Bcl-2/Bax结果  23-24
    1.2.5 模型大鼠视网膜凋亡细胞检测结果  24-26
  1.3 讨论  26-29
    1.3.1 高眼压模型大鼠的建立  26
    1.3.2 高眼压大鼠外周血EPCs数量  26-27
    1.3.3 高眼压大鼠视网膜病理变化  27-29
  1.4 小结  29-30
二、辛伐他汀对高眼压大鼠外周血EPCs数量及视网膜病理变化的影响  30-39
  2.1 对象和方法  30-32
    2.1.1 实验动物、主要仪器和实验试剂  30-31
    2.1.2 主要试剂、液体配制  31
    2.1.3 实验方法  31-32
    2.1.4 统计学分析  32
  2.2 结果  32-36
    2.2.1 各组大鼠眼压测量  32-33
    2.2.2 模型大鼠外周血EPCs数量  33-34
    2.2.3 干预组大鼠视网膜组织HE染色结果  34
    2.2.4 干预组大鼠视网膜组织免疫组化Bcl-2/Bax结果  34-35
    2.2.5 干预组大鼠视网膜凋亡细胞检测结果  35-36
  2.3 讨论  36-37
  2.4 小结  37-39
结论  39-40
参考文献  40-43
发表论文和参加科研情况说明  43-44
综述  44-51
  综述参考文献  48-51
致谢  51

高眼压大鼠外周血内皮祖细胞数量变化及辛伐他汀干预作用

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