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大肠埃希菌胞嘧啶脱氨酶突变体治疗结构癌的实验研究

作　者: 邓龙颖
导　师: 沈历宗
学　校: 南京医科大学
专　业: 外科学
关键词: 自杀基因 细菌胞嘧啶脱氨酶 突变体 5-氟胞嘧啶 结肠癌
分类号: R735.35
类　型: 硕士论文
年　份: 2012年
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内容摘要


目的：研究大肠埃希菌胞嘧啶脱氨酶(bCD)突变体D314A联合5-氟胞嘧啶(5-FC)在鼠移植瘤模型中对结肠癌的治疗效果。材料与方法：构建含野生型bCD基因(bCDwt)及bCD突变体D314A基因(bCD-D314A)两种携带绿色荧光蛋白重组慢病毒载体，将其感染人结肠癌细胞株LoVo细胞并获得稳定转染细胞系—LoVo/null、 LoVo/bCDwt及LoVo/bCD-D314A。将LoVo细胞、 LoVo/null、LoVo/bCDwt及LoVo/bCD-D314A等四种细胞分别皮下注射至Balb/c裸鼠体内构建结肠癌移植瘤模型。LoVo细胞接种两周后，腹腔注射PBS或5-FC（500mg/kg），每日1次，连续2周。观察小鼠皮下肿瘤体积和生存情况。结果：测序结果显示成功构建了含野生型bCD基因(bCDwt)及bCD突变体D314A基因(bCD-D314A)的重组慢病毒质粒。慢病毒载体具有高效的基因传递的效率，RT-PCR证实bCDwt及bCD-D314A基因已经成功进入了LoVo细胞，在各治疗组中，单独转移基因或单独使用5-FC均不能影响肿瘤的生长，然而bCDwt/5-FC和bCD-D314A/5-FC治疗后能抑制肿瘤的生长并显著延长裸鼠的生存期(P<0.05)。bCD-D314A/5-FC组较bCDwt/5-FC组更能抑制肿瘤的生长(P<0.05)，而且bCD-D314A/5-FC治疗组裸鼠的生存期明显长于bCDwt/5-FC组(P<0.05)。结论：相对于野生型bCD，bCD-D314A突变体能够显著增强抗肿瘤的效应，有望为结肠癌治疗提供了一种新的方法。

全文目录


缩略词  5-6
中文摘要  6-7
ABSTRACT  7-9
前言  9-12
材料与方法  12-26
  1、材料  12-14
    1.1 细胞株、菌株、动物及质粒  12
    1.2 试剂及试剂盒  12-13
    1.3 主要仪器  13-14
    1.4 主要试剂配制  14
  2、方法  14-26
    2.1 细胞复苏及细胞培养  14-15
    2.2 重组bCDwt和bCD-D314A质粒构建及纯化  15-19
    2.3 重组慢病毒构建，细胞转染及稳定细胞系产生  19-23
    2.4 RT-PCR鉴定LoVo细胞bCD基因  23-25
    2.5 bCD突变体D314A抗结肠癌作用的体内研究  25
    2.6 统计学分析  25-26
结果  26-33
  1 重组慢病毒质粒的鉴定  26-27
  2 慢病毒载体转染基因的效率  27-28
  3 慢病毒载体转染LoVo细胞bCD基因的鉴定  28-29
  4 野生型bCD和bCD-D314 A联合5-FC对人结肠癌移植瘤的抗肿瘤效应  29-33
讨论  33-35
参考文献  35-39
综述  39-51
  参考文献  46-51
攻读学位期间发表文章情况  51-52
致谢  52

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中图分类: > 医药、卫生 > 肿瘤学 > 消化系肿瘤 > 肠肿瘤 > 结肠肿瘤
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