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槐耳浸膏诱导人胃癌细胞系MKN28、SGC7901凋亡及抑制其MMPs表达的研究

作　者: 李晓文
导　师: 冀学宁
学　校: 遵义医学院
专　业: 肿瘤内科
关键词: 槐耳浸膏 胃癌 凋亡 基质金属蛋白酶
分类号: R735.2
类　型: 硕士论文
年　份: 2012年
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内容摘要


目的：本实验通过中药制剂槐耳浸膏与不同分化水平胃癌细胞相互作用,检测槐耳浸膏在抑制其增殖、促进凋亡、抑制MMP-2、MMP-9表达水平中的作用,为槐耳浸膏在临床治疗胃癌提供切实的理论依据。方法：常规贴壁培养人胃高、中分化腺癌细胞系MKN28、SGC7901,倒置显微镜观察和MTT法检测浓度为0.5mg/ml、1mg/ml、3mg/ml、5mg/ml和1Omg/ml的槐耳浸膏对MKN28和SGC7901细胞的增殖抑制作用；应用免疫荧光双染法(AO/EB)和流式细胞仪分别检测浓度为Omg/ml、5mg/ml、10mg/ml的槐耳浸膏作用于MKN28和SGC7901细胞系48h后细胞凋亡情况；浓度为Omg/ml、5mg/ml、10mg/ml槐耳浸膏作用于MKN28细胞48小时后,RT-PCR法分别检测MMP-2和MMP-9的mRNA表达水平。结果：浓度为0.5mg/ml、1mg/ml、3mg/ml、5mg/ml和10mg/ml的槐耳浸膏作用MKN28和SGC7901细胞系于24h、48h、72h后,倒置显微镜下观察到各组均出现细胞体积缩小、膜破裂,核固缩碎裂等细胞凋亡的明显征象；MTT法示：1、与未加药组相比,浓度为0.5mg/ml的槐耳浸膏作用于MKN28细胞系24h、48h、72h后,抑制率分别为5.73%、7.50%、20.50%；1mg/ml浓度的抑制率分别为11.70%、13.83%、15.59%；3mg/ml浓度的抑制率分别为16.06%、23.79%、24.73%；5mg/ml浓度的抑制率分别为24.91%、32.59%、34.67%；10mg/ml浓度的抑制率分别为30.98%、45.01%、46.15%。2、与未加药组相比,浓度为0.5mg/ml的槐耳浸膏作用于SGC7901细胞系24h、48h、72h后,抑制率分别为2.43%、2.61%、5.60%；1mg/ml浓度的抑制率分别为5.63%、5.92%、13.70%；3mg/ml浓度的抑制率为12.48%、19.83%、22.02%；5mg/ml浓度的抑制率为23.10%、30.37%、33.93%；10mg/ml浓度的抑制率29.68%、35.28%、37.03%。P<0.05,以上数据有统计学差异；免疫荧光AO/EB双染法检测浓度为0mg/ml、5mg/ml、10mg/ml的槐耳浸膏作用于MKN28和SGC7901细胞系48h后,其凋亡程度与药物浓度均呈剂量依赖性；流式细胞仪结果示浓度为0mg/ml、5mg/ml、10mg/ml的槐耳浸膏作用于MKN28、 SGC7901细胞系48h后,MKN28的凋亡率分别为41.76%、95.62%、94.13%；SGC7901的凋亡率分别为33.77%、83.74%、92.77%；RT-PCR法检测浓度为Omg/ml、5mg/ml、10mg/ml的槐耳浸膏作用于MKN28细胞系48h后,经灰度分析示,其MMP-2/β-actin中mRNA表达分别为0.321、0.260、0.205, MMP-9/β-actin中1mRNA的表达分别为0.244、0.192、0.135,随着药物浓度的增加,MMP-2、MMP-9中mRNA的表达水平下降。结论：实验结果表明浓度为0.5mg/ml、1mg/ml、3mg/ml、5mg/ml和10mg/ml的槐耳浸膏可抑制人胃高、中分化腺癌MKN28、SGC7901的细胞生长、诱导其凋亡,且呈剂量依赖性；随着药物作用时间延长,抑制率呈时间依赖性,其48h抑制率的增幅高于72h；相同作用条件下,高分化MKN28细胞株较中分化SGC7901细胞株凋亡率高；槐耳浸膏可抑制高分化腺癌MKN28细胞中MMP-2、MMP-9的分泌,其抑制程度与药物浓度呈正相关。槐耳浸膏可抑制胃癌细胞生长、诱导其凋亡、抑制MMP-2和MMP-9的分泌,具有一定抗肿瘤作用,为其今后应用于临床辅助治疗胃癌提供了理论依据。

全文目录


英文缩略词表  4-5
中文摘要  5-7
Abstract  7-9
前言  9-10
第一部分：槐耳浸膏在抑制胃癌细胞生长、诱导凋亡中的作用  10-20
  1 实验材料  10-11
  2 实验方法  11-13
  3 实验结果  13-20
第二部分：槐耳浸膏抑制胃癌细胞MKN28中MMP-2、MMP-9的表达研究  20-23
  1 实验材料  20
  2 实验方法  20-21
  3 实验结果  21-23
讨论  23-25
结论  25-26
参考文献  26-28
综述  28-38
  参考文献  34-38
致谢  38-39
作者简介  39

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中图分类: > 医药、卫生 > 肿瘤学 > 消化系肿瘤 > 胃肿瘤
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