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人重组RIZ1基因真核表达载体的构建及其在TE-13细胞中的表达

作　者: 王硕
导　师: 张鹏
学　校: 天津医科大学
专　业: 外科学
关键词: 视网膜母细胞瘤蛋白结合锌指结构基因 pcDNA3.1(+) RT-PCR 载体蛋白表达 Western-blotting
分类号: R735.1
类　型: 硕士论文
年　份: 2012年
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内容摘要

目的：构建人pcDNA3.1(+)/RIZ1真核表达载体并转染人食管鳞状细胞癌TE-13细胞,观察RIZ1在TE-13稳定细胞株中的表达。方法：1.用RT-PCR方法从人食管癌组织中提取tRNA。2.将从食管癌组织中提取的tRNA逆转录为cDNA。3.根据NCBI公布的RIZ1序列设计五对引物。4.从食管癌组织的cDNA中对RIZ1各段进行PCR扩增。5.将扩增的PCR产物连入T载体,并测序。6.将测序正确的含PCR产物的质粒酶切后连入pcDNA3.1(+)真核表达载体。7.将连入pcDNA3.1(+)的RIZ1基因进行酶切鉴定并测序。8.复苏并培养人食管鳞状细胞癌TE-13细胞。9.提取pcDNA3.1(+)/RIZ1超纯质粒。10.将pcDNA3.1(+)/RIZ1超纯质粒转染入人食管鳞状细胞癌TE-13细胞。11.Western-blotting鉴定pcDNA3.1(+)/RIZ1在人食管鳞状细胞癌TE-13细胞中蛋白表达。结果：1.PCR扩增产物经12g\L琼脂糖凝胶电泳鉴定目的基因条带大小约5157bp,与理论预期值一致。构建完成人重组RIZ1真核表达载体pcDNA3.1(+)/RIZ1,测序结果经BLAST比对,与NCBI公布的RIZ1序列完全一致。2.Western boltting检测显示,转染pcDNA3.1(+)\RIZ1的人食管鳞状细胞癌TE-13细胞中RIZ1蛋白获得表达。结论：成功构建人重组RIZ1真核表达载体并转染人食管鳞状细胞癌TE-13细胞,转染细胞株中RIZ1蛋白呈显著表达。

全文目录

中文摘要  4-6
Abstract  6-10
縮略语/符号说明  10-11
前言  11-13
一、人RIZ1基因pcDNA3.1(+)真核表达载体的构建  13-39
  1.1 对象和方法  13-34
    1.1.1 实验对象  13
    1.1.2 主要化学试剂  13-15
    1.1.3 主要溶液配制  15-16
    1.1.4 主要实验仪器设备和耗材  16-17
    1.1.5 实验方法  17-34
  1.2 结果  34-36
    1.2.1 用引物PCR扩增目的基因  34
    1.2.2 PCR产物与T载体进行连接后酶切鉴定  34-35
    1.2.3 将各段基因连入表达载体  35-36
  1.3 讨论  36-38
  1.4 小结  38-39
二、pcDNA3.1 (+)/RIZ1 质粒在人食管鳞状细胞癌TE-1 3细胞中的表达  39-49
  2.1 实验对象和方法  39-46
    2.1.1 实验对象  39
    2.1.2 主要实验用品  39-40
    2.1.3 主要实验仪器设备和耗材  40-41
    2.1.4 实验方法  41-46
  2.2 结果  46
  2.3 讨论  46-48
  2.4 小结  48-49
结论  49-50
参考文献  50-53
综述  53-65
  综述参考文献  61-65
发表论文和参加科研情况说明  65-66
致谢  66

人重组RIZ1基因真核表达载体的构建及其在TE-13细胞中的表达

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