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转录因子AP-2α在MCF-7细胞中与Pokemon的相互作用及其对survivin表达的调控研究

作　者: 孙钦升
导　师: 徐威; 蒋宇扬
学　校: 沈阳药科大学
专　业: 微生物与生化药学
关键词: Pokemon AP-2α survivin 转录因子相互作用
分类号: R730.2
类　型: 硕士论文
年　份: 2009年
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内容摘要


转录因子Pokemon是一个重要的原癌基因,在胚胎发育、分化和癌症的发生过程中发挥重要作用。Survivin是凋亡蛋白抑制因子家族的重要成员,与肿瘤的发生、转移、耐药性产生以及癌症患者的存活期密切相关。本研究通过OATFA分析发现并进一步鉴定了其与抑癌基因AP-2α间存在相互作用。转录因子Pokemon和AP-2α的相互作用影响survivin的表达,通过进一步研究,发现AP-2α是通过直接结合于survivin的启动子上游来调控survivin的表达。在mRNA水平上,survivin的表达受AP-2α的抑制,这种抑制伴随细胞药物敏感性的增加。这些发现完善了survivn表达调控的信号通路,并对肿瘤发生和治疗的研究有重要意义。

全文目录


摘要  11-12
ABSTRACT  12-13
英文缩写说明  13-14
第一章 前言  14-26
  1.1 POKEMON基因简介  14-15
  1.2 AP-2基因概述  15-17
  1.3 SURVIVIN简介  17-18
  1.4 细胞凋亡  18-19
  1.5 研究转录因子相互作用的方法  19-23
    1.5.1 芯片分析  19-20
    1.5.2 免疫共沉淀  20-21
    1.5.3 GST-pull down  21
    1.5.4 荧光共定位  21-22
    1.5.5 酵母双杂交  22-23
  1.6 转录因子调节靶基因的研究思路与方法  23-24
    1.6.1 启动子活性分析  23
    1.6.2 染色质免疫共沉淀  23-24
    1.6.3 转录因子结合位点分析  24
    1.6.4 基因表达水平检测  24
  1.7 课题的创新点  24
  1.8 硕士论文的主要内容  24-26
    1.8.1 AP-2α和pokemon相互作用关系的发现和证明  24-25
    1.8.2 AP-2α表达质粒的构建及与pokemon的互作对survivin启动子活性影响  25
    1.8.3 AP-2α在survivin启动子结合的验证及位点分析  25
    1.8.4 AP-2α对survivin表达的调节作用及对细胞行为的影响  25-26
第二章 AP-2A和POKEMON相互作用关系的发现和证明  26-38
  2.1 引言  26
  2.2 材料与方法  26-32
    2.2.1 细胞  26
    2.2.2 菌种  26
    2.2.3 质粒载体  26
    2.2.4 主要试剂  26-27
    2.2.5 主要溶液配制  27-28
    2.2.6 仪器  28-29
    2.2.7 方法  29-32
  2.3 实验结果  32-37
    2.3.1 与Pokemon相互作用的转录因子的研究  32-35
    2.3.2 免疫共沉淀实验对OATFA的验证  35
    2.3.3 GST pull down实验对Pokemon和AP-2α相互作用的验证  35-36
    2.3.4 Pokemon和AP-2α在细胞内的荧光共定位  36-37
  2.4 讨论  37-38
第三章 POKEMON和AP-2A相互作用对下游基因SURVIVIN的影响及AP-2A对SURVIVIN调控的机理研究  38-56
  3.1 引言  38
  3.2 材料与方法  38-49
    3.2.1 主要试剂  38-39
    3.2.2 溶液配制  39-40
    3.2.3 主要仪器  40
    3.2.4 研究方法  40-49
  3.3 实验结果  49-54
    3.3.1 AP-2α表达质粒构建  49
    3.3.2 AP-2α和pokemon表达质粒对survivin启动子活性的影响  49-52
    3.3.3 AP-2α直接结合于survivin启动子而影响其活性  52-53
    3.3.4 survivin启动子上可能的AP-2α位点的突变及突变后启动子活性分析  53-54
    3.3.5 AP-2α影响survivin的mRNA水平  54
  3.4 讨论  54-56
第四章 AP-2A的表达变化对细胞药物敏感性的影响  56-60
  4.1 引言  56
  4.2 材料与方法  56-57
    4.2.1 主要试剂  56
    4.2.2 溶液配制  56
    4.2.3 主要仪器  56-57
    4.2.4 研究方法  57
  4.3 实验结果  57-59
    4.3.1 AP-2α表达质粒增加MCF-7细胞的药物敏感性  57-58
    4.3.2 AP-2α siRNA降低了293T细胞的药物敏感性  58-59
  4.4 讨论  59-60
参考文献  60-65
发表文章目录  65-66
致谢  66

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中图分类: > 医药、卫生 > 肿瘤学 > 一般性问题 > 肿瘤病理学、病因学
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