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TRPV1/2及环境因素对北京地区儿童哮喘的影响研究

作　者: 朱泽轶
导　师: 徐东刚
学　校: 中国人民解放军军事医学科学院
专　业: 分子遗传学
关键词: 儿童哮喘 TRPV1 TRPV2 单核苷酸多态性 mRNA 环境因素关联研究
分类号: R725.6
类　型: 硕士论文
年　份: 2011年
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内容摘要

支气管哮喘是儿童常见的慢性气道炎症,是当今世界威胁公共健康最常见的慢性肺部疾病。近些年,其发病率和死亡率呈逐年上升趋势。哮喘不仅对患儿的身心健康造成伤害,而且影响患儿家庭成员的工作和生活,导致疾病负担加重,进而给我国带来沉重的社会负担。虽然临床上有许多哮喘治疗方案,但目前哮喘仍是一种病因及发病机制并不十分清楚的复杂病症。因此,开展哮喘的病因及病理机制的研究对患儿及社会具有重大意义。遗传因素和环境因素是影响哮喘发生发展的两个重要方面,作为哮喘的风险因素之一的遗传因素是决定哮喘易感性个体差异的基础,单核苷酸多态性是其主要形式;而环境因素如过敏原、气体污染物等,对哮喘的诱发作用不可忽视。我们的研究目的是通过病例对照研究,揭示TRPV1、TRPV2基因与哮喘易感性的联系,并结合过敏原暴露水平资料和室内外污染物暴露水平资料,评价环境因素及遗传因素对儿童哮喘的影响。野香草受体型离子通道(TRPVs)在呼吸系统广泛表达,对Ca2+具有较高的通透性,而Ca2+是细胞内重要的信号转导分子,参与气道炎症因子的释放、气道平滑肌的收缩等重要生理功能的调节。目前对于TRPV基因多态性与呼吸系统疾病发生风险的相关性研究表明:TRPV1-I585V多态性与儿童哮喘发生的低风险有关;TRPV4的多态性与慢性阻塞性肺疾病相关;TRPV5-A563T可提高钙离子的流动性。上述研究结果提示:TRPV亚家族与呼吸系统疾病具有较强的关联性,TRPV1与TRPV2同属于TRPV亚家族,且同源性高达50%以上。目前,还没有TRPV2多态性与支气管哮喘关联性方面的报道。本研究通过病例对照研究验证了TRPV1和TRPV2两个基因在哮喘儿童与对照儿童中表达水平的差异性有统计学意义(P<0.05),我们推测TRPV2基因多态性可能导致TRPV2活性或表达水平的改变,从而影响哮喘的发生进程。通过Haploview软件下载和NCBI数据库选取TRPV2基因的标签SNPs,最终确定11个SNP位点,包括rs14039,rs3813768,rs3813769,rs8121,rs12936240,rs 12602006,rs4792738,rs7223205,rs1129235,rs4792742,rs4629007,上述位点与呼吸系统疾病的相关性还未见报道。采用SNPstream技术,对上述SNP位点进行了基因分型。应用Logistic回归在校正年龄、性别等混杂因素的条件下,评估了上述11个位点与哮喘发生风险之间的关联性。关联研究结果显示:在哮喘总体样本中rs14039、rs 4792742多态性与哮喘的易感性相关,其它位点与哮喘的发生风险无关联。经多重检验校正后,rs14039位点与哮喘易感性之间仍然具有很强的关联性,C等位与哮喘的高发风险相关。关联研究提示我们,TRPV1的多态位点(他人完成)和TRPV2的rs14039位点与儿童哮喘的易感性相关。rs4790521、rs4790522位于TRPV1的3’UTR区域,rs14039位于TRPV2的外显子中,上述三个位点可能是导致哮喘的功能位点,也可能与真正的功能位点表现为连锁不平衡,我们通过关联性研究在从mRNA水平初步验证了三个多态位点的C等位与儿童哮喘的高发风险有关。应用多因素Logistic回归对儿童哮喘的遗传因素(TRPV1/2基因表达水平、TRPV2的SNPs)、环境因素(室外PM10、室内甲醛、室内总挥发性物质)、多种特异性IgE、总IgE进行分析,结果显示:室内TVOC与霉菌的暴露水平升高可增加儿童哮喘发生的风险。TRPV1、TRPV2基因表达水平升高的儿童患哮喘的风险分别是两基因表达水平正常儿童的1.35倍(OR=1.35, 95%CI=1.09-1.68, P=0.01)和1.58倍(OR=1.58, 95%CI=1.03-2.42, P=0.04)。研究结果提示:TRPV1/2基因可能是儿童哮喘的危险因素。

全文目录

英文缩略词表  6-8
摘要  8-10
Abstract  10-12
前言  12-15
第一部分 TRPV2 基因多态性与儿童哮喘的关联性研究  15-41
  摘要  15
  前言  15-16
  1.1 材料和方法  16-21
    1.1.1 研究人群  16
    1.1.2 实验材料和试剂  16-17
    1.1.3 仪器设备  17
    1.1.4 实验方法  17-20
    1.1.5 血清总IgE水平测定  20
    1.1.6 统计分析  20-21
  1.2 结果  21-39
    1.2.1 入选样本的人口学资料及临床特征  21-22
    1.2.2 TRPV2 基因入选SNPs信息  22-23
    1.2.3 PCR扩增和延伸引物设计结果  23
    1.2.4 关联分析结果  23-39
  1.3 讨论  39-40
  参考文献  40-41
第二部分 TRPV1/2 基因表达水平与儿童哮喘的关联研究  41-50
  摘要  41
  2.1 材料与方法  41-43
    2.1.1 研究人群及相关数据来源  41
    2.1.2 实验试剂  41-42
    2.1.3 仪器设备  42
    2.1.4 实验方法  42-43
    2.1.5 统计分析  43
  2.2 结果  43-49
    2.2.1 入选样本的人口学资料  43
    2.2.2 病例组、对照组儿童特异性IgE水平统计结果  43-44
    2.2.3 实时定量PCR结果  44-45
    2.2.4 TRPV1 和TRPV2 基因在哮喘和对照儿童中的表达差异  45-46
    2.2.5 TRPV1 基因表达水平和 rs4790521、rs4790522 的关联性分析结果  46-47
    2.2.6 TRPV2 的基因表达水平和 rs14039 关联分析结果  47-49
  2.3 讨论  49-50
第三部分 TRPV1/2 基因与环境因素对儿童哮喘的多因素回归分析  50-57
  摘要  50
  前言  50-51
  3.1 材料与方法  51
    3.1.1 数据来源  51
    3.1.2 分析软件  51
    3.1.3 主要统计学方法  51
  3.2 结果  51-55
    3.2.1 室内外空气污染物的差异性检验结果  51
    3.2.2 室内外空气污染物与 rs14039 对儿童哮喘的多重 logistic 回归分析  51-52
    3.2.3 室内外空气污染物与TRPV1 基因表达水平对儿童哮喘的多重logistic回归分析.  52-53
    3.2.4 室内外空气污染物与TRPV2 基因表达水平对儿童哮喘的多重logistic回归分析.  53-54
    3.2.5 室内外空气污染物与TRPV1/2 基因对儿童哮喘的多重logistic回归分析  54-55
  3.3 讨论  55-56
  参考文献  56-57
全文结论  57-58
文献综述  58-65
  参考文献  62-65
代表性论著  65-71
个人简介  71-72
致谢  72

TRPV1/2及环境因素对北京地区儿童哮喘的影响研究

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