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环介导等温扩增法检测尿液DD3在前列腺癌早期诊断中的价值探讨
作 者: 许衍超
导 师: 贾瑞鹏
学 校: 南京医科大学
专 业: 外科学
关键词: 环介导等温扩增法 尿液 DD3 前列腺癌
分类号: R737.25
类 型: 硕士论文
年 份: 2013年
下 载: 7次
引 用: 0次
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内容摘要
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背景:血清前列腺特异性抗原(prostate specific antigen,PSA)为临床工作中最常用的前列腺癌(prostate cancer,PCa)生物诊断标记物,但PSA不具有PCa组织特异性,从而导致了一些过度的前列腺穿刺活检,增加了患者不必要的痛苦和经济负担。因此,探讨PCa特异诊断标记物乃临床工作中的当务之急。DD3(differential display code3,DD3)是一种具有PCa组织特异性的基因,有研究表明其可作为一种新的PCa特异诊断标志物,但现有检测方法多存在费时、复杂、对检测设备要求高等不足,致使DD3检测工作在临床难以应用和推广。因此,探寻一种快速、便捷且高效的检测方法亦成为迫切需要之一。环介导等温扩增法(loop-mediated isothermal amplification,LAMP)是较为新颖的核酸扩增技术,近年来在胃癌、乳腺癌的临床检测工作中得到较为积极应用,使疾病诊断率显著上升,突显了LAMP法特异、快速、便捷等优势,这为使用LAMP法检测前列腺癌DD3以提高PCa诊断效率展现了较为广阔的应用前景。目的:探讨LAMP法检测尿液DD3在PCa诊断中的价值,以探索提高PCa诊断特异性、敏感性的方法。方法:选择血清PSA异常者80例,其中PSA>20ng/ml37例、10~20ng/ml26例、4~10ng/ml17例,均行前列腺穿刺活检,27例诊断为PCa,53例诊断为良性前列腺增生(benign prostatic hyperplasia, BPH)。27例PCa患者中10例患者接受根治性切除术,其余接受保守治疗。所有BPH患者均行经尿道前列腺电切术(transurethral resection of the prostate, TURP),所有手术患者均于术前行前列腺按摩,留取尿液30ml。另采集5例健康者前列腺组织和20例健康者尿液30ml作为正常组对照。首先检测血清PSA异常者TURP术后切除组织和健康者前列腺组织DD3表达,并将检测结果和组织病理诊断结果进行对比,以探讨DD3在PCa组织中的表达特征。同时,摸索LAMP法中最佳扩增温度、最佳Betaine浓度、最佳Mg2+浓度等参数,探索LAMP法检测DD3的实验方法、条件。采用已建立的实验方法检测血清PSA异常者尿液和健康者尿液DD3表达,并将检测结果和组织病理诊断结果进行对比,以探讨LAMP法检测尿液DD3在PCa诊断中的应用价值与可行性。结果:80例血清PSA异常者中,27例PCa患者切除组织标本中DD3均呈阳性表达,53例BPH患者切除组织标本中有1例DD3阳性表达;LAMP法中最佳扩增温度为63℃、最佳Betaine浓度为0.4M、最佳Mg2+浓度为4mM;27例PCa患者其尿液标本中DD3均呈阳性表达,53例BPH患者尿液标本中有1例DD3阳性表达;5例健康者前列腺组织与20例正常者尿液均未见DD3阳性表达。结论: DD3具有较高的PCa组织特异性和较好的敏感性; LAMP法检测尿液DD3的阳性结果与前列腺病理诊断结果具有较高的一致性,且快速、简单、便捷,提示LAMP法检测尿液DD3可提高PCa诊断效率、降低前列腺穿刺活检率,值得进一步扩大样本进行临床研究。
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全文目录
中文摘要 5-7 Abstract 7-10 前言 10-13 材料和方法 13-23 结果 23-33 讨论 33-38 参考文献 38-43 文献综述 43-65 综述(一) DD3 基因在前列腺癌中的研究进展 43-54 参考文献 50-54 综述(二) 前列腺癌筛查研究进展 54-65 参考文献 60-65 附录 65-67 (一) 中英文对照表 65-66 (二) 攻读硕士学位期间发表的文章 66-67 致谢 67
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中图分类: > 医药、卫生 > 肿瘤学 > 泌尿生殖器肿瘤 > 男性生殖器肿瘤 > 前列腺肿瘤
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