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壮骨健膝方促大鼠软骨细胞增殖及其机制的研究

作　者: 李保华
导　师: 苏友新
学　校: 福建中医学院
专　业: 中医骨伤科学
关键词: 大鼠骨性关节炎软骨细胞分子药理作用机制 @壮骨健膝方
分类号: R285.5
类　型: 硕士论文
年　份: 2009年
下　载: 29次
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内容摘要

目的:观察中药壮骨健膝方含药血清对大鼠软骨细胞增殖的影响,摸索其促进软骨细胞增殖的最佳条件;并通过对大鼠软骨细胞IHH信号传导通路中关键的细胞膜受体Patchedl及细胞核转录因子GLI1 mRNA表达的检测,探讨壮骨健膝方促软骨细胞增殖的作用机制。方法:1.采用联合酶消化法分离大鼠关节软骨细胞并建立其体外培养体系;2.采用MTT实验方法检测壮骨健膝方含药血清对大鼠软骨细胞增殖的影响,并通过比较在该方含药血清不同添加浓度及不同时间作用下对软骨细胞增殖的差异,确定其促增殖的最佳作用条件;3.采用RT-PCR方法检测壮骨健膝方含药血清对大鼠软骨细胞中细胞膜受体Patched1及细胞核转录因子GLI1 mRNA表达水平的影响。结果:1.采用联合酶消化方法建立的大鼠软骨细胞体外培养体系,经倒置显微镜下形态学观察及甲苯胺蓝染色鉴定,确认分离培养的细胞符合软骨细胞的生物学特征。2.对软骨细胞增殖的影响:壮骨健膝方含药血清组与同浓度空白血清对照组相比,在第24h只有20%浓度的促软骨细胞增殖作用有显著差异(p＜0.05);在第48h 5%、20%浓度的两组促软骨细胞增殖作用有显著差异(p＜0.05),而10%浓度组有非常显著差异(p＜0.01);在第72h只有5%、10%浓度的两组促软骨细胞增殖作用有显著差异(p＜0.05)。在第24h、48h及72h三个时间点各浓度壮骨健膝方含药血清虽均对软骨细胞的增殖起促进作用,但增殖效应不随浓度呈比例的递增趋势,其中以第48h的时间点作用最强。壮骨关节丸含药血清组与同浓度空白血清对照组相比,只有第48h、72h 5%、10%浓度的两组促软骨细胞增殖的作用有显著差异(p＜0.05)。壮骨关节丸含药血清组与同浓度壮骨健膝方含药血清组相比,在数值上虽然前者促软骨细胞增殖的强度各浓度组均不及壮骨健膝方,但只有在第48h时10%浓度作用条件下,后者促软骨细胞增殖的作用显著强于前者(p＜0.05)。经比较分析,决定将壮骨健膝方含药血清促软骨细胞增殖作用的最佳条件定为10%浓度作用48h,并将其作为后续实验的干预方案。3.对大鼠软骨细胞IHH信号传导通路的影响:与空白血清对照组相比,壮骨健膝方含药血清组及壮骨关节丸含药血清组均能显著促进细胞膜受体Patched1及细胞核转录因子GLI1 mRNA的表达(p＜0.05);两药物组相比,虽然在数值上壮骨健膝方组稍高于壮骨关节丸组,但无显著统计学意义(p＞0.05)。结论:采用联合酶消化方法分离培养的大鼠软骨细胞,在3代以内能保持软骨细胞的表型,符合软骨细胞的生物学特征;5%、10%、20%浓度的壮骨健膝方含药血清均能促进软骨细胞的增殖,但以10%浓度含药血清作用48h促进软骨细胞增殖的效应最佳,而且优于壮骨关节丸的作用效应;在此作用条件下,中药壮骨健膝方含药血清能够促进大鼠软骨细胞IHH信号传导通路中细胞膜受体Patched1及细胞核转录因子GLI1 mRNA的高表达,这可能是该方促进大鼠软骨细胞增殖的作用机制之一。

壮骨健膝方促大鼠软骨细胞增殖及其机制的研究

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