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抗肿瘤中药白英化学成分及药物动力学研究

作　者: 齐伟
导　师: 孙立新
学　校: 沈阳药科大学
专　业: 药物分析学
关键词: 白英 化学成分 抗肿瘤活性 生物碱 绿原酸 药物动力学
分类号: R284
类　型: 硕士论文
年　份: 2009年
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内容摘要


白英(Solanum lyratum Thunb.)为茄属植物,又名白毛藤,为常用抗肿瘤中药。本文以白英为研究对象,抗肿瘤活性作为指导,运用多种色谱技术主要对生物碱类化合物进行了分离、纯化,对得到的化合物利用波谱技术进行了结构鉴定；以Hela细胞为模型,采用MTT法测定所得化合物的抗肿瘤活性；建立了同时测定白英中绿原酸、咖啡酸含量的HPLC-UV法；采用HPLC-UV法和HPLC-ELSD法分别对白英中士的宁和(3-O-β-D-glucopyranosyl-(1→2)-β-D-glucopyranosyl-(1→4)-β-D-galactopyranoside-(25ξ)-solanidan-3β,23β-diol)进行了定量分析；建立HPLC-UV法测定大鼠血浆中绿原酸的浓度,比较了口服单体和白英提取物后绿原酸在大鼠体内的药物动力学行为。1.白英化学成分研究本文利用硅胶柱色谱、大孔树脂柱色谱、凝胶柱色谱、制备薄层色谱、半制备高效液相色谱和重结晶等多种分离手段对白英提取物进行分离纯化,分离得到8个化合物,通过光谱数据及理化性质鉴定了化学结构。分别为：N-反式-阿魏酰基-3-甲基多巴胺(1)、士的宁(2)、N-trans-feruloyloctopamine(3)、蒙花苷(4)、dihydroleptinidine(5)、Saladulcidine(6)、(3-O-β-D-glucopyranosyl-(1→2)-β-D-glucopyranosyl-(1→4)-β-D-galactopyranoside-(25ξ)-sol-anidan-3β,23β-diol) (7)、p-胡萝卜苷(8)。其中化合物(1)-(6)为首次从该植物中分离得到。2.化合物的抗肿瘤活性研究选取体外培养的人宫颈癌Hela细胞为模型,以半数抑制浓度(IC50)为指标,采用四甲基偶氮唑盐(MTT)比色法进行活性筛选。结果表明：白英各萃取物和分离过程中各流分均有不同程度的抗肿瘤活性,首次发现化合物dihydroleptinidine的抗Hela肿瘤细胞活性。3.建立同时测定白英中绿原酸、咖啡酸含量的HPLC-UV法建立RP-HPLC-UV法同时测定白英中绿原酸、咖啡酸的含量,色谱柱为Diamonsil ODS-C18(250 mm×4.6 mm,5μm)柱,流动相为甲醇-体积分数0.05%的磷酸水溶液(25：75,v／v),检测波长327 nm。绿原酸质量浓度在0.5～32.0μg·mL-1 (r=0.9999)线性关系良好,平均回收率为99.9%(RSD=1.5%)；咖啡酸质量浓度在10.0～640.0 ng·mL-1(r=0.9999)内线性关系良好,平均回收率为99.9%(RSD=1.4%)。测定了20个不同产地白英药材中绿原酸、咖啡酸的含量,结果表明该方法简便、准确、重复性良好,可用于同时测定白英中绿原酸、咖啡酸的含量。4.建立测定白英中士的宁含量的HPLC-UV法建立RP-HPLC-UV法测定白英中的士的宁,色谱柱为Diamonsil-C18 (250 mm×4.6 mm,5μm)柱,流动相为乙腈-10 mmoL·L-1磷酸二氢钾(8：92,v／v,磷酸调pH至2.5),检测波长254 nm。士的宁质量浓度在1.0～16.0μg·mL-1(r=0.9999)线性关系良好,平均回收率为99.1%(RSD=3.2%)。测定了10个不同产地白英药材中士的宁的含量,结果表明所采用的含量测定方法简单、准确,可用于白英中士的宁的含量测定。5.建立测定白英中(3-O-β-D-glucopyranosyl-(1→2)-β-D-glucopyranosyl-(1→4)-β-D-galactopyranoside-(25ξ)-solanidan-3β,23β-diol)含量的HPLC-ELSD法建立HPLC-ELSD法测定白英中(3-O-β-D-glucopyranosyl-(1→2)-β-D-glucopyranosyl-(1→4)-β-D-galactopyranoside-(25ξ)-solanidan-3β,23β-diol)的含量,色谱柱为Elite-ODS C18 (200 mm×4.6 mm,5μm)柱,流动相为乙腈-体积分数0.02%三乙胺水溶液(56：44,v／v),检测器漂移管温度为95℃,氮气流速2.3L-min-1。(3-O-β-D-glucopyranosyl-(1→2)-β-D-glucopyranosyl-(1→4)-β-D-galactopyranoside-(25ξ)-solanidan-3β,23β-diol)在0.40～4.0μg线性关系良好(r=0.9996),平均回收率为99.7%。该方法准确度、灵敏度、重复性良好,可用于白英中(3-O-β-D-glucopyranosyl-(1→2)-β-D-glucopyranosyl-(1→4)-β-D-galactopyranoside-(25ξ)-solanid-an-3β,23β-diol)的含量测定。6.白英提取物和绿原酸单体在大鼠体内的药动学比较及生物利用度研究建立了测定大鼠血浆中绿原酸含量的反相高效液相色谱分析方法,比较口服白英提取物以及绿原酸单体后,绿原酸在大鼠体内的药动学及生物利用度差异。血浆样品采用异丙醇液-液萃取,上清液于40℃水浴下N2吹干,残渣用100μL流动相溶解。以葛根素为内标,色谱柱为Diamonsil-C18 (250 mm×4.6 mm,5μm)柱,流动相为甲醇-0.05%磷酸水溶液(23：77,v／v),检测波长327 nm。绿原酸在0.0500-15.0 mg·L-1(r=0.9973)范围内线性关系好。绿原酸平均回收率为70.50(RSD=4.9%)。方法的定量下限为50 ng·mL-1。日内精密度RSD≤5.1%,日间精密度RSD≤9.5%,准确度RE为≤-7.1%。3组大鼠(n=6)分别口服绿原酸50.0mg·kg-1、白英提取物(相当于绿原酸50.0 mg·kg-1)以及静注绿原酸2.0 m g-kg-1后,测定血浆中绿原酸的浓度,所得数据采用DAS2.0药动学软件处理,计算其相应的药动学参数。口服绿原酸、白英提取物以及静脉给予绿原酸后的主要药动学参数如下：Tmax(0.49±0.32)、(0.81±1.08)h, T1]/2(2.66±0.48)、(2.63±1.12、(0.91±0.10) h, Cmax为(0.52±0.20)、(0.35±0.08)、(9.99±0.73) mg·L-1, AUC(0-t)为(1.87±0.91)、(0.93±0.46)、(4.33±0.39)mg.L-1·h-1,AUC(0-∞)为(2.09±0.92)、(1.09±0.44)、(4.42±0.38)mg·L-1·h-1,Ke为(0.27±0.05),(0.32±0.17),(0.77±0.09)h-1。大鼠口服绿原酸单体的绝对生物利用度为4.800%,大鼠口服中药白英提取物后的相对生物利用度为52.20%。研究结果表明：本文建立的方法准确、可靠,可用于大鼠体内绿原酸的药动学研究。口服绿原酸单体、中药白英提取物后绿原酸的药动学行为有较大差异,白英中其他成分可抑制绿原酸的吸收。

全文目录


摘要  9-12
ABSTRACT  12-16
第一章 前言  16-23
  1.1 中药白英研究概况  16-21
    1.1.1 白英的本草考证  16
    1.1.2 白英的化学成分  16-18
    1.1.3 白英的药理作用  18-21
    1.1.4 白英的临床应用  21
    1.1.5 白英的质量控制  21
  1.2 立题依据和主要研究内容  21-23
第二章 白英的化学成分与体外抗肿瘤活性研究  23-32
  2.1 实验材料  23-24
  2.2 白英化学成分的提取与分离  24-26
  2.3 化合物的结构鉴定  26-29
  2.4 体外抗肿瘤活性  29-32
    2.4.1 试药配制和细胞培养  29-30
    2.4.2 体外抗肿瘤活性试验(MTT法)  30
    2.4.3 实验结果  30-31
    2.4.4 讨论  31
    2.4.5 小结  31-32
第三章 白英质量控制方法研究  32-51
  3.1 RP-HPLC-UV法同时测定白英中绿原酸和咖啡酸含量分析方法的建立  32-39
    3.1.1 实验材料  32
    3.1.2 实验方法  32-37
    3.1.3 样品测定  37-38
    3.1.4 讨论  38-39
  3.2 RP-HPLC-UV法测定白英中士的宁含量分析方法的建立  39-45
    3.2.1 实验材料  39
    3.2.2 实验方法  39-44
    3.2.3 样品测定  44
    3.2.4 讨论  44-45
  3.3 RP-HPLC-ELSD法测定白英中(3-O-β-D-glucopyranosyl-(1→2)-β-D-glucopyranosyl-(1→4)-β-D-galactopyranoside-(25ζ)-solanidan-3β,23β-diol)含量分析方法的建立  45-51
    3.3.1 实验材料  45
    3.3.2 实验方法  45-49
    3.3.3 样品测定  49-50
    3.3.4 讨论  50-51
第四章 白英提取物和绿原酸在大鼠体内的药动学比较及生物利用度研究  51-60
  4.1 实验材料  51-52
  4.2 分析方法的建立  52-56
    4.2.1 色谱条件及系统适用性试验  52
    4.2.2 白英样品的制备  52-53
    4.2.3 血浆样品处理  53
    4.2.4 标准溶液及内标溶液的配制  53
    4.2.5 分析方法确证  53-56
  4.3 白英中绿原酸在大鼠体内的药物动力学研究  56-59
    4.3.1 给药方法  56
    4.3.2 药动学参数计算与统计学分析  56-57
    4.3.3 药物浓度-时间曲线  57-59
    4.3.4 生物利用度  59
  4.4 讨论  59-60
第五章 结论  60-61
参考文献  61-66
附图  66-73
发表文章  73-74
致谢  74

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中图分类: > 医药、卫生 > 中国医学 > 中药学 > 中药化学
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