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基于成分敲出/敲入的中药（黄连）药效物质辨识和质量控制模式的研究

作　者: 李俊贤
导　师: 李宝才; 肖小河; 鄢丹
学　校: 昆明理工大学
专　业: 药物化学
关键词: 成分敲出/敲入黄连药效物质辨识质量控制组分中药
分类号: R284
类　型: 硕士论文
年　份: 2013年
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内容摘要

中药的药效物质辨识与质量控制研究一直是中医药研究的重点,也是影响中医药现代化发展的关键问题。为了准确地、快速地找出药效物质,更好地控制中药的质量,本文借用成分敲出/敲入的思想,针对黄连的药效物质辨识和质量控制模式进行研究,建立了一套完善的黄连抗菌(痢疾杆菌Shigella dysenteriae)的药效物质研究及质量控制的模式。主要研究内容和结果如下：(1)不同来源、品种的黄连生物碱成分含量波动较大采用HPLC分析不同来源、品种的黄连水提物中主要生物碱成分含量信息。结果显示：黄连各生物碱的含量存在显著差异,且不同品种的黄连中总生物碱含量也呈较明显的品种性差异。(2)化学分析法与生物活性检测法联用,有助于药效物质的发现采用HPLC法测定了3个品种、6个浓度共18个黄连样品的化学信息；采用微量量热法比较各黄连样品对痢疾杆菌生长代谢的影响,并用主成分分析法对所有样品的生物热活性参数进行分析。结果发现：3种黄连抑菌效果存在明显差异,抑菌活性以云连最强,味连次之,雅连最弱。用典型相关分析法分析化学指纹谱信息与生物指纹图谱信息,结果显示：与抑菌活性存在密切的相关性化学成分是小檗碱(Ber)、黄连碱(Cop)、药根碱(Jat)、巴马汀(Pal),与药典所规定的黄连指标性成分一致。(3)通过黄连各成分逐一敲出,筛选出了黄连中主要的抗菌药效物质利用TLC对黄连样品进行分离,确定6个需要“敲出”的目标成分是：非洲防己碱(Col)、Jat、表小檗碱(Epi)、Ber、Pal、Cop;采用UPLC-MS对“敲出”成分及其阴性样品进行鉴定,评价“敲出”工作的彻底性及检测“敲出”前后各物质成分是否发生变化。结果显示：各敲出目标成分均被很好的分离出来,阴性样品中无残留；各目标成分敲出前后的离子碎片相同,说明TLC分离没有破坏各目标成分的化学结构。利用微量量热法考察与评价同浓度各敲出目标成分抑制活性强弱顺序为：Cop> Ber> Epi> Jat+Col> Pal>非生物碱部分；在黄连水提液自然配比下,6种生物碱对痢疾杆菌生长代谢均有一定的抑制作用,且以黄连碱与小檗碱的抑菌活性最强。考察各敲出成分间的作用关系发现非生物碱部分对黄连的抑菌活性有一定的拮抗作用；比较6种生物碱间的相互作用发现小檗碱与黄连碱存在协同作用,而叠加作用存在于其他4种生物碱与小檗碱和黄连碱的药物活性之间。(4)通过已确定的关键药效物质的敲入,确定了黄连药效物质的含量限度将已确定的小檗碱和黄连碱“递增敲入”到各阴性样品中,采用HPLC和热动力学分析法对不同浓度的“敲入”样品进行化学分析与生物活性评价,初步制定小檗碱和黄连碱适宜的范围为8.08%-31.92%和4.05%-14.45%。(5)确定小檗碱和黄连碱的最佳剂量配比,为黄连“组分中药”的研制提供新思路和路径采用棋盘法设计,荧光吸收法来评价黄连碱与小檗碱不同配比作用下的抑菌活性强弱,找出了黄连碱与小檗碱的最佳剂量配比为2：1,相对较优配比为：4：1,1：2,1：4。本研究利用成分敲出／敲入的研究模式,初步建立黄连的药效物质的筛选模式与质量控制模式,并发现黄连主要的抗痢疾杆菌的药效物质,制定出其含量限度范围及其最佳剂量配比,为黄连的质量控制标准的进一步发展和完善提供参考,同时也为未来中药的重点的研究方向——药效物质辨识和质量控制研究提供了新的研究思路与方法。

全文目录

摘要  4-6
ABSTRACT  6-15
第一章绪论  15-25
  1.1 中药药效物质辨识及质量控制的研究现状  15-19
    1.1.1 中药药效物质辨识及质量控制研究的紧迫性与现实意义  15-16
    1.1.2 现行中药药效物质辨识模式的利与弊  16-17
    1.1.3 现行中药质量控制模式的利与弊  17-19
  1.2 基于成分敲出/敲入的药效物质辨识与质量控制模式  19-21
    1.2.1 成分敲出/敲入模式的研究思路与技术路线  19-21
    1.2.2 成分敲出/敲入模式需解决的关键问题  21
  1.3 本课题的整体研究思路  21-25
    1.3.1 研究目标与意义  21-22
    1.3.2 研究思路与实验方案  22-23
    1.3.3 模式药及药效评价模型的选择依据  23-25
第二章黄连药材样品采集加工及质量常规检测  25-30
  2.1 黄连药材样品采集及制备  25-26
    2.1.1 黄连药材样品采集  25
    2.1.2 黄连样品的制备  25-26
  2.2 不同品种黄连样品的化学分析  26-30
    2.2.1 实验准备  26
    2.2.2 溶液的制备  26-27
    2.2.3 化学分析方法的考察  27-29
    2.2.4 3种品种黄连的多成分含量测定结果  29-30
第三章基于“谱-效”关系表达黄连抗痢疾杆菌的药效物质筛选  30-43
  3.1 不同来源黄连样品的化学分析  30-32
  3.2 基于生物热动力学的抑菌活性评价新方法  32-39
    3.2.1 生物热动力学概述及方法学研究  32-34
    3.2.2 不同来源黄连样品的生物热动力学分析  34-38
    3.2.3 数据处理  38-39
  3.3 “谱-效”关系辨识黄连中主要的抗痢疾杆菌成分  39-41
  3.4 本章小结  41-43
第四章基于成分敲出的黄连抗痢疾杆菌的物质基础研究  43-66
  4.1 目标组分的敲出  43-45
    4.1.1 供试样品母液的制备  43
    4.1.2 黄连样品的薄层色谱分析  43-45
  4.2 目标敲出组分的鉴定  45-54
    4.2.1 仪器与试剂  45
    4.2.2 供试品溶液的制备  45-46
    4.2.3 UPLC-MS法鉴定各目标敲出组分  46-54
  4.3 目标敲出组分的抗细菌作用评价  54-64
    4.3.1 基于生物热动力学法评价各敲出组分的抑菌活性强弱  54-62
    4.3.2 各目标敲出组分间相互作用关系的考察  62-64
  4.4 本章小结  64-66
第五章基于成分敲入的黄连药效物质含量限度的确定  66-75
  5.1 目标组分敲入样品的化学指纹谱分析  66-68
  5.2 目标组分敲入样品作用下痢疾杆菌的生物热活性指纹图谱  68-71
  5.3 目标敲入组分抗痢疾杆菌作用“量-效”关系的建立  71-72
  5.4 黄连中各目标组分抗痢疾杆菌作用含量限度标准的制定  72-73
  5.5 本章小结  73-75
第六章黄连中抗痢疾杆菌“组分中药”的发现  75-84
  6.1 评价抑菌活性新方法荧光分析法的建立  75-76
    6.1.1 仪器  75
    6.1.2 材料  75-76
    6.1.3 方法  76
    6.1.4 荧光吸收法的条件优化  76
  6.2 基于荧光分析法小檗碱和黄连碱的抑菌活性测定  76-78
  6.3 基于组分优化配比的关键药效物质的“质—效”分析  78-83
    6.3.1 黄连关键药效物质不同含量配比抗痢疾杆菌的评价  78-80
    6.3.2 黄连关键药效物质的最优配比的验证  80-83
  6.4 本章小结  83-84
第七章结语与展望  84-87
  7.1 基于黄连抗痢疾杆菌的药效物质的发现及质量控制模式的建立  84-85
  7.2 有待进一步完善与解决的问题  85-86
  7.3 本课题研究模式的前景与展望  86-87
致谢  87-89
参考文献  89-97
附录A 攻读硕士期间发表论文目录  97

基于成分敲出/敲入的中药（黄连）药效物质辨识和质量控制模式的研究

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