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叉枝鸦葱生物碱类物质的分离纯化及抗氧化活性研究

作　者: 李海军
导　师: 白红进
学　校: 塔里木大学
专　业: 生物化学与分子生物学
关键词: 叉枝鸦葱总生物碱纯化工艺分离纯化抗氧化
分类号: R284.2
类　型: 硕士论文
年　份: 2012年
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内容摘要

植物源生物碱大多具有药用活性,它是一类研究最早和研究最成功的一大类天然产物。现有研究表明,叉枝鸦葱(Scorzonera divaricata)具有多种药理活,关于其化学成分分离纯化的研究报道较少,其生物碱成分的研究还处于含量测定水平,对其生物碱化学成分结构鉴定及生物活性研究尚未见报道,因此对其生物碱有效成分的分离纯化与生物活性研究具有基础作用。本研究以叉枝鸦葱(Scorzonera divaricata.)植物地上部分为实验材料,建立了总生物碱含量的测定方法一酸性染料比色法,并测定了其总生物碱含量；研究了总生物碱的大孔树脂纯化工艺、生物碱的分离纯化以及总生物碱的抗氧化活性,旨在为该植物的开发利用提供科学依据。实验结果如下：1.通过生物碱单项成分预试确定了叉枝鸦葱中含有生物碱成分。2.建立了叉枝鸦葱总生物碱酸性染料比色法测定方法。测定总生物碱的适宜条件为：缓冲液pH为4.6,溴甲酚绿酸性染料缓冲溶液的最佳体积为6mL,氯仿10mL震摇混匀,静置,分取氯仿层,干燥后,在430nm处进行含量测定,测得叉枝鸦葱总生物碱的含量为0.808mg/g。3.研究了大孔树脂纯化叉枝鸦葱生物碱工艺条件。通过对5种不同大孔树脂的静态吸附实验和静态解析实验考察分析,筛选出HP-20为叉枝鸦葱生物碱分离纯化的最佳树脂。通过对HP-20大孔树脂的上样和洗脱条件的实验考察,确定HP-20纯化生物碱的最佳条件为：样液pH8.0,浓度0.5mg/mL,体积为20mL(2g湿树脂)；洗脱剂选用70%乙醇,纯化后总生物碱的纯度由27.6%上升为64.7%。4.通过反复硅胶柱和凝胶柱分离,得到一个单体化合物,经红外、核磁共振等光谱方法鉴定为β-谷甾醇。5.研究了叉枝鸦葱总生物碱的还原力,清除DPPH·、ABTS+、·OH的能力。结果表明：叉枝鸦葱生物碱总碱具有一定还原力、对DPPH·、ABTS+、·OH具有一定的清除能力。在实验条件下,其还原力、自由基清除能力与其浓度呈量效关系。

全文目录

摘要  4-5
ABSTRACT  5-6
目录  6-9
第一章文献综述  9-20
  1.1 叉枝鸦葱的植物学形态及分布  9-10
    1.1.1 叉枝鸦葱的植物学形态  9-10
    1.1.2 叉枝鸦葱的分布  10
  1.2 叉枝鸦葱的药用功效及化学成分研究  10
    1.2.1 叉枝鸦葱的药用功效  10
    1.2.2 叉枝鸦葱的成分研究  10
  1.3 生物碱的研究现状  10-17
    1.3.1 生物碱  10-14
    1.3.2 生物碱的提取方法  14-16
    1.3.3 生物碱的分离纯化方法  16-17
    1.3.4 生物碱的含量测定方法  17
  1.4 本课题的立题依据及意义  17
  1.5 本课题的主要研究内容  17-20
第二章叉枝鸦葱总生物碱的定性定量分析研究  20-27
  2.1 材料与试剂  20
  2.2 生物碱成分定性鉴定方法  20-22
    2.2.1 沉淀试剂的配制  21
    2.2.2 预试液的制备  21
    2.2.3 义枝鸦葱生物碱的定性鉴定  21-22
  2.3 结果与分析  22
  2.4 义枝鸦葱总生物碱的含量测定  22-26
    2.4.1 材料与试剂  22-23
    2.4.2 义枝鸦葱生物碱供试品溶液的制备  23
    2.4.3 对照品溶液的配制  23
    2.4.4 测定波长的选择  23
    2.4.5 实验条件的优化  23-24
    2.4.6 标准曲线的绘制  24-25
    2.4.7 精密度试验  25
    2.4.8 显色稳定性试验  25
    2.4.9 样品生物碱含量测定  25
    2.4.10 加样回收率的测定  25-26
  2.5 结论与讨论  26-27
    2.5.1 结论  26
    2.5.2 讨论  26-27
第三章叉枝鸦葱生物碱纯化工艺的研究  27-34
  3.1 材料与仪器  27
    3.1.1 材料与试剂  27
    3.1.2 实验仪器  27
  3.2 实验方法  27-28
    3.2.1 大孔树脂的参数性质  27-28
    3.2.2 大孔树脂的前处理  28
    3.2.3 供试样液的配制  28
    3.2.4 总生物碱液吸光度的测定  28
  3.3 大孔树脂型号的筛选  28
    3.3.1 大孔树脂的静态吸附解析实验  28
  3.4 HP-20树脂吸附解析条件的优化  28-30
    3.4.1 上样液的pH的选择  29
    3.4.2 上样液浓度的选择  29
    3.4.3 上样量的选择  29
    3.4.4 洗脱剂的选择  29
    3.4.5 纯化后生物碱纯度的测定  29-30
  3.5 结果与分析  30-32
    3.5.1 大孔树脂的型号选择结果  30-31
    3.5.2 样液pH选择的结果  31
    3.5.3 样液体积选择结果  31
    3.5.4 样液浓度选择的结果  31-32
    3.5.5 洗脱剂浓度的选择结果  32
    3.5.6 纯化前后纯度测定结果  32
  3.6 讨论与结论  32-34
第四章叉枝鸦葱生物碱化学成分的研究  34-40
  4.1 材料与仪器  34
  4.2 试验方法  34-38
    4.2.1 提取分离流程图  34-36
    4.2.2 叉枝鸦葱乙醇粗提物的制备  36
    4.2.3 叉枝鸦葱总生物碱的制备  36
    4.2.4 叉枝鸦葱生物碱的柱层析条件选择  36-37
    4.2.5 叉枝鸦葱生物碱的硅胶柱层析分离  37-38
  4.3 结果与分析  38-39
    4.3.1 硅胶柱层析条件的选择结果  38
    4.3.2 分离纯化结果  38
    4.3.3 化合物的结构鉴定结果  38-39
  4.4 结论  39
  4.5 讨论  39-40
第五章叉枝鸦葱总生物碱的抗氧化活性研究  40-47
  5.1 材料与方法  40-41
    5.1.1 实验材料与试剂  40
    5.1.2 实验样液的制备  40-41
  5.2 抗氧化活性的研究  41-43
    5.2.1 还原力测定  41
    5.2.2 DPPH自由基清除率测定  41
    5.2.3 ABTS+自由基清除率测定  41-42
    5.2.4 羟基自由基清除率测定  42-43
  5.3 结果与分析  43-45
    5.3.1 还原力测定结果  43
    5.3.2 DPPH自由基清除率测定结果  43-44
    5.3.3 ABTS自由基清除率测定结果  44-45
    5.3.4 羟基自由基清除能力测定结果  45
  5.4 结论与讨论  45-47
全文总结  47-48
参考文献  48-51
附录  51-53
致谢  53-54
作者简介  54

叉枝鸦葱生物碱类物质的分离纯化及抗氧化活性研究

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