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UPLC/MS~n方法快速筛选生物活性糖苷及其代谢物

作　者: 乔婧芳
导　师: 莫卫民; 曹小吉
学　校: 浙江工业大学
专　业: 农药学
关键词: UPLC/MSn技术离子液体西藏胡黄连黑鳗藤C21甾体苷化学稳定性整体代谢轮廓
分类号: R284
类　型: 硕士论文
年　份: 2012年
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内容摘要

全球化“回归自然”的潮流必将给天然药物领域带来前所未有的机遇。要想让我国传统中药被世界认同和接受，我们必须加快中药质量标准化步伐，明确药理作用机制，从而保证其药效。因此，建立一种灵敏、可靠的分析方法对复杂中药中的活性成分进行快速筛选是中药全球化进程中亟待解决的关键问题之一。本课题成功运用超高效液相色谱-多级质谱联用技术，分别从中药活性成分含量、化学稳定性、体内代谢途径三方面展开研究：快速筛选了西藏胡黄连中环烯醚萜苷类、葫芦素苷类和苯乙醇糖苷类等15种活性化合物；深入研究了黑鳗藤中5种C21甾体糖苷类化合物的化学稳定性及其降解途径；初步分析了黑鳗藤新苷K在大鼠体内代谢转化的途径。具体内容如下：1．应用离子液体超声辅助萃取方法（ILUAE）和UPLC/ESI-QTOFMSn技术从萃取、分离、定性、定量四个角度对西藏胡黄连中的活性糖苷类化合物展开研究。与传统萃取方法相比，条件优化后的ILUAE方法在缩短萃取时间、绿色环保的基础上，大大提高了目标物的萃取效率。通过使用UPLC将分离分析效率提高到常规液相色谱方法的2-3倍。通过ESI-QTOFMS2分析得到目标化合物的特征离子碎片，提供了糖元部分、苷元部分和酯基取代基的类型和位置等结构信息。同时根据断裂规律和特征碎片离子可以很容易地将位置异构的环烯醚萜苷类同分异构体区分开来。本实验建立的液质分析方法成功地在13.5分钟内分离鉴定出西藏胡黄连中15种活性糖苷类化合物，其中6’-O-vanilloylcatalpol是首次在西藏胡黄连中检测到。方法学验证结果表明该方法检测的目标化合物在5.0¹00.0ng/mL的浓度范围内线性关系良好（R²为0.9991⁰.9998），方法回收率在89.60%¹09.02%之间，精确度为0.93%¹.44%，能够满足分析的要求。2．运用UPLC/ESI-MSⁿ技术对黑鳗藤中5种C21甾体苷化合物的化学稳定性进行研究。通过对其酸破坏、碱破坏、高温破坏、氧化破坏的降解产物进行分析，考查目标化合物的化学稳定性，推断其降解途径。实验结果表明，C₂₁甾体苷化合物在强酸条件下极不稳定，糖苷键易发生水解，丢失非还原末端的糖而产生具有更高免疫活性的短糖链苷化合物；在强碱条件下缓慢分解，发生苷元部分酯的水解反应；在加热和氧化的条件下较稳定，不易分解。此结论对日后免疫药物的研究具有重要作用。3．本课题建立了黑鳗藤中的黑鳗藤新苷K在大鼠体内生物转化的整体代谢情况研究的质谱分析方法。运用质谱裂解规律与代谢途径特征相结合的研究思路，对口服给药大鼠的脑、胃、肝脏、肾脏、小肠、粪便等部位进行研究，推测出可能的代谢产物结构和代谢途径，为黑鳗藤C21甾体苷体内免疫机理的研究奠定基础，进而为免疫新药的开发提供新思路。

全文目录

摘要  4-6
ABSTRACT  6-10
第1章绪论  10-27
  1.1 前言  10
  1.2 质谱技术简介  10-11
  1.3 液质联用技术介绍  11-12
  1.4 离子液体的介绍  12
  1.5 液质联用技术在药物分析中的应用  12-19
    1.5.1 中药成分分析  12-14
      1.5.1.1 药物定量分析  13
      1.5.1.2 药物定性分析  13-14
    1.5.2 新药的研发  14-15
    1.5.3 中药质量控制研究  15-16
    1.5.4 药物代谢和药物动力学研究  16-19
      1.5.4.1 药物代谢研究  17-18
      1.5.4.2 药物动力学研究  18-19
  1.6 本课题的意义和主要内容  19-22
  参考文献  22-27
第2章快速筛选西藏胡黄连中生物活性糖苷的方法研究  27-57
  2.1 引言  27-28
  2.2 实验部分  28-30
    2.2.1 主要材料与试剂  28
    2.2.2 离子液体超声辅助萃取  28-29
    2.2.3 传统萃取方法  29
    2.2.4 超高效液相色谱条件  29-30
    2.2.5 质谱条件  30
  2.3 结果与讨论  30-51
    2.3.1 离子液体超声辅助萃取方法的条件优化  30-32
    2.3.2 ILUAE法与传统萃取方法的比较  32-33
    2.3.3 萃取方法效能评价  33-34
    2.3.4 超高效液相色谱条件的优化  34-38
    2.3.5 同分异构体的分离  38
    2.3.6 Sg-4，Sg-7，和Sg-8的结构确证  38-42
    2.3.7 Sg-1，Sg-2，Sg-3和Sg-6的结构确证  42-47
    2.3.8 Sg-5，Sg-9，Sg-10，Sg-11，Sg-12和Sg-13的结构确证  47-51
    2.3.9 Sg-14和Sg-15的结构确证  51
  2.4 小结  51-53
  参考文献  53-57
第3章黑鳗藤中C_(21) 甾体苷类化合物化学稳定性研究  57-80
  3.1 引言  57-58
  3.2 实验部分  58-61
    3.2.1 样品和试剂  58
    3.2.2 浸膏的提取  58-59
    3.2.3 超高效液相色谱条件  59
    3.2.4 电喷雾- 离子阱质谱条件  59-60
    3.2.5 电喷雾- 飞行时间质谱条件  60
    3.2.6 酸稳定性实验  60
    3.2.7 碱稳定性实验  60
    3.2.8 热稳定性实验  60-61
    3.2.9 氧化稳定性实验  61
  3.3 结果与讨论  61-77
    3.3.1 C_(21)甾体糖苷 Op -1 ~ 5 的结构确证  62-66
    3.3.2 黑鳗藤提取物酸降解  66-72
      3.3.2.1 黑鳗藤提取物酸降解产物结构分析  68-71
      3.3.2.2 黑鳗藤提取物酸降解途径分析  71-72
    3.3.3 黑鳗藤提取物碱降解  72-75
    3.3.4 黑鳗藤提取物热稳定性研究  75-76
    3.3.5 黑鳗藤提取物氧化稳定性研究  76-77
  3.4 小结  77-78
  参考文献  78-80
第4章黑鳗藤中C_(21) 甾体苷类化合物整体代谢轮廓分析的LC - MS~n方法研究  80-91
  4.1 引言  80-82
  4.2 实验部分  82-84
    4.2.1 样品和试剂  82-83
    4.2.2 试药配制和样品的收集和处理  83
    4.2.3 高效液相色谱条件  83
    4.2.4 电喷雾- 离子阱质谱条件  83-84
    4.2.5 电喷雾- 飞行时间质谱条件  84
  4.3 结果与讨论  84-89
    4.3.1 原药黑鳗藤新苷 K 结构分析  84-86
    4.3.2 考查部位的选择  86
    4.3.3 代谢产物的结构分析  86-88
    4.3.4 不同部位代谢产物的存在情况  88-89
  4.4 小结  89-90
  参考文献  90-91
第5章结论  91-93
致谢  93-94
攻读学位期间发表的论文  94

UPLC/MS~n方法快速筛选生物活性糖苷及其代谢物

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