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胡芦巴生物碱的提取、纯化及分离的研究

作　者: 于洋
导　师: 刘振春
学　校: 吉林农业大学
专　业: 食品加工与安全
关键词: 胡芦巴生物碱提取分离纯化
分类号: R284
类　型: 硕士论文
年　份: 2012年
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内容摘要

胡芦巴(Trigonella foenum-grae-cum L.)属于豆科蝶形花亚科,是一年生草本植物。胡芦巴生物碱有降血糖作用、调血脂作用、抗癌、抗肿瘤作用、抗溃疡作用、脑缺血损伤保护、补肾壮阳、减肥等功效。迄今为止,检测出胡芦巴种子含龙胆碱(Gentianine)、番木瓜碱(Carpaine)、胆碱(Choline)、胡芦巴碱(Ttrigonelline)四种生物碱。本研究以胡芦巴成熟种子粉末为原料,采用加热回流法,优化生物碱提取工艺。在其基础上用AB-8大孔树脂纯化生物碱、高速逆流色谱法分离纯化生物碱。为生物碱的提取、纯化与分离进一步研究,提供理论依据。试验结果如下：以溶剂浸提法进行单因素试验,选出对提取工艺影响显著的三个因素。以胡芦巴碱为标准样品通过高效液相色谱法(HPLC),测得在18～19min时出峰,得标准曲线y=75970494x+77968,对照液在16～96μg·mL-1呈现良好的线性关系(r=0.9999,n=6)。响应面优化试验,以生物碱得率为响应值,考察乙醇浓度、提取时间、pH值对胡芦巴生物碱得率的影响。结论：影响胡芦巴总生物碱得率的因素的影响程度,由强到弱依次为：乙醇浓度、提取时间、pH值。其中乙醇浓度的影响最为显著,表现为提取曲面较为陡峭。经Design Expert软件对进行各因素回归拟合,得到最终回归方程方：Y=0.86+0.068×A+0.070×B-0.025×C+0.023×A×B+0.010×A×C-0.021×B×C-0.044×A2-0.073×B2-0.066×C2。用响应面对工艺参数进行优化分析,以生物碱得率为评价指标,得相应提取工艺优化条件：浓度83.8%,试验时间5.32h,pH：2.64。根据实际情况修正工艺参数：浓度85%,试验时间5.5h,pH：3。验证性试验,胡芦巴总生物碱的平均得率为0.904%(n=3,RSD=1.17%)。用AB-8大孔树脂纯化胡芦巴生物碱,以紫外分光光度法、特征性沉淀反应、薄层色谱法(TLC)、高效液相色谱法(HPLC)鉴定生物碱。确定AB-8大孔树脂纯化胡芦巴总生物碱的洗脱步骤如下：预处理AB-8大孔树脂,湿法装柱,蒸馏水水洗,至无醇味。上柱静置2h,吸附胡芦巴提取液,用3倍柱体积的水、50%的乙醇、70%的乙醇进行洗脱。然后分别收集各部分洗脱液,减压浓缩。水洗可以洗脱大量的水溶性杂质,50%的乙醇可以将黄酮类的杂质洗脱出来。经过上述处理,胡芦巴生物碱达到基本的分离纯化目的。应用高速逆流色谱法(HSCCC)分离胡芦巴生物碱,本试验溶剂系统选择：正己烷-乙酸乙酯-甲醇-水(2：5：2：5)。溶剂系统配置1000mL,经溶剂系统选择软件优化正己烷-乙酸乙酯-甲醇-水分别为131.69、423.96、212.77、330.97mL。用高速逆流色谱法分离样品,样品浸膏20mg,上下相各取2mL,转速800r/min,检测波长313nm,检测时间150min,进样一次。结论：分离出四个峰A、B、C、D,薄层色谱鉴定-碘蒸气显色,推断四种皆为生物碱。用高效液相色谱法对四个组分进行检测,组分C出峰时间与胡芦巴碱出峰时间基本一致,推断C组分为胡芦巴碱。其他三个组分无法确定具体成分。

全文目录

摘要  4-6
Abstract  6-10
第一章绪论  10-17
  1.1 胡芦巴的植物学特性  10
  1.2 胡芦巴的资源分布及国内外胡芦巴的主要品种  10-11
  1.3 胡芦巴化学成分及药理作用研究  11-15
  1.4 胡芦巴生物碱活性  15
  1.5 立题背景及研究意义  15-16
  1.6 课题研究的基本内容  16-17
第二章胡芦巴总生物碱的提取工艺  17-32
  2.1 提取的材料与方法  17-18
    2.1.1 仪器与材料  17-18
    2.1.2 方法  18
  2.2 单因素试验  18-19
  2.3 高效液相法测定胡芦巴总生物碱含量  19
  2.4 响应面法试验设计  19-20
  2.5 结果与分析  20-29
  2.6 讨论  29-30
  2.7 本章小结  30-32
第三章 AB-8大孔树脂纯化胡芦巴总生物碱的研究  32-43
  3.1 AB-8大孔树脂纯化生物碱  32-33
  3.2 洗脱液沉淀与显色反应  33
  3.3 薄层色谱检识洗脱液  33-34
  3.4 高效液相色谱法分析70、90%乙醇洗脱液  34
  3.5 结果与分析  34-40
  3.6 讨论  40-41
  3.7 本章小结  41-43
第四章高速逆流色谱法分离胡芦巴生物碱  43-50
  4.1 试验材料与仪器  43
  4.2 方法  43-44
  4.3 结果与讨论  44-47
  4.4 讨论  47-48
  4.5 本章小结  48-50
结论  50-51
创新点  51-52
参考文献  52-55
致谢  55-56
个人简介  56

胡芦巴生物碱的提取、纯化及分离的研究

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