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向日葵菌核病生防菌的筛选鉴定及其综合防治

作　者: 李小娟
导　师: 周洪友
学　校: 内蒙古农业大学
专　业: 植物病理学
关键词: 向日葵菌核病牛物防治蜡状芽孢杆菌挥发性物质
分类号: S476.7
类　型: 硕士论文
年　份: 2012年
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内容摘要

向日葵菌核病是由核盘菌(Sclerotinia sclerotiorum (Lib.)de Bary)引起的一种世界性病害,其寄主范围十分广泛,危害严重。本研究对来自内蒙古呼和浩特市、包头市、乌兰察布市、巴彦淖尔市、赤峰市、通辽市以及河北省等向日葵产区的30余个带有植物根的土壤样品,进行向日葵菌核病生防菌株的分离,并对其防效进行测定,旨在为向日葵菌核病的生物防治提供理论基础和研究依据。具体结果表明：1.从各地区采集的30余个根际土壤样品中,经过分离筛选得到细菌菌株1300多株,对核盘菌有较好拮抗效果的共25株。其中菌株CF4-51抑菌效果最好,抑菌带宽度为3.2cm。室内离体叶片测定,防治效果为85.3%,盆栽和大田防效分别达到了78.4%和64.6%。2.通过细菌形态观察和生理生化指标测定,结合16S rDNA序列分析,将菌株CF4-51鉴定为蜡状芽孢杆菌(B. cereus)。3.菌株CF4-51在向日葵根际定殖动态实验中,发现菌株CF4-51均能在向日葵根际和根表定殖。此外,生防菌株CF4-51还可在向日葵体内很好地定殖,距向日葵茎基部5cm处可以检测到菌株CF4-51的存在。4.经生防细菌菌株培养条件测定发现,菌株CF4-51最佳培养条件为25℃-28℃,初始pH为6左右,培养48h就可达最大菌量。5.通过测定菌株CF4-51所产生挥发性物质的抑菌活性,发现菌株CF4-51所产生的挥发性气体对核盘菌菌丝生长和菌核形成具有一定的抑制作用,离体叶片防效达83.6%。通过分离纯化蜡状芽孢杆菌CF4-51所产生的挥发性抑菌物质,结果表明,挥发性物质抑菌物质至少包括18种挥发性物质,这些物质其中包括醇类、胺类、烷类、腈类和酸类物质。对这些挥发性物质的纯品进行抑菌活性检测,结果发现,有2种物质1-Methyldodecylamine(十二烷基甲胺)和Acetamide,2-cyano-(氰基乙酰胺)可以抑制核盘菌菌核的形成。6.通过探索向日葵菌核埋藏时间和深度对菌核干重和萌发活力的相关性的研究,发现随着埋藏时间的延长和埋藏深度的增加,菌核受腐烂程度越深,净重减轻,萌发活力逐渐丧失,并且不同地点结果一致。7.通过模拟内蒙古河套地区田间冬季漫灌实验发现,冬季灌水有助于菌核降解,有效降低了菌核病的发病率。

全文目录

摘要  3-4
Abstract  4-12
1 引言  12-17
  1.1 向日葵菌核病概述  12-13
    1.1.1 向日葵菌核病病原(S.Sclerotiorum)及侵染循环  12-13
    1.1.2 向日葵菌核病(S Sclerotiorum)致病机理  13
  1.2 向日葵菌核病的防治研究  13-17
    1.2.1 核盘菌的化学防治  13-14
    1.2.2 核盘菌的农业防治  14
    1.2.3 抗性品种的应用  14
    1.2.4 对菌核病的生物防治  14-17
      1.2.4.1 生物防治的概念及意义  14-15
      1.2.4.2 生物防治在菌核病防治上的应用  15-17
  1.3 本研究的意义  17
2 生防菌株的筛选  17-24
  2.1 材料与方法  17-18
    2.1.1 分离土样和病原菌来源  17
    2.1.2 培养基  17-18
      2.1.2.1 真菌培养基  17
      2.1.2.2 细菌培养基  17-18
    2.1.3 向日葵品种  18
  2.2 拮抗菌株的分离与筛选  18
  2.3 拮抗菌株离体叶片防效复筛  18
  2.4 拮抗菌株生防效果测定  18-19
    2.4.1 拮抗菌株离体叶片防效测定  18
    2.4.2 拮抗菌株室内防效测定  18-19
    2.4.3 拮抗菌株田间防效  19
  2.5 结果与分析  19-23
    2.5.1 所得拮抗菌株群  19-20
    2.5.2 拮抗菌株离体叶片防效复筛  20
    2.5.3 菌株CF4-51对核盎菌的抑制作用  20-21
    2.5.4 菌株CF4-51离体叶片防效测定结果  21-22
    2.5.5 菌株CF4-51盆栽防效测定结果  22-23
    2.5.6 菌株CF4-51对向日葵菌核病的田间防效  23
  2.6 结论与讨论  23-24
3 菌株CF4-51鉴定  24-26
  3.1 材料与方法  24
    3.1.1 形态特征及生理生化特征的测定方法参阅文献  24
    3.1.2 分子生物学鉴定  24
  3.2 结果与分析  24-25
    3.2.1 形态特征及生理生化特征的测定  24-25
    3.2.2 CF4-51的16S rDNA测序分析  25
  3.3 结论与讨论  25-26
4 菌株CF4-51在土壤中定殖能力评估  26-29
  4.1 材料和方法  26-27
    4.1.1 供试菌株  26-27
    4.1.2 菌株双抗标记  27
    4.1.3 CF4-51在向日葵体内和根际定殖试验  27
  4.2 结果与分析  27-29
    4.2.1 灌根处理菌株CF4-51在向日葵茎基部定殖动态  27
    4.2.2 灌根处理菌株CF4-51在向日葵根际定殖动态  27-29
  4.3 结论与讨论  29
5 菌株CF4-51发酵条件优化  29-32
  5.1 材料和方法  29-30
    5.1.1 供试菌株  29
    5.1.2 CF4-51种子液的制备  29
    5.1.3 菌株CF4-51最适培养时间测定  29
    5.1.4 菌株CF4-51最适培养pH测定  29-30
    5.1.5 菌株CF4-51最适培养温度测定  30
  5.2 结果与分析  30-32
    5.2.1 菌株CF4-51最适培养时间测定  30
    5.2.2 最适培养pH值测定结果  30-31
    5.2.3 最适培养温度测定结果  31-32
  5.3 结论与讨论  32
6 菌株CF4-51抗真菌活性物质研究  32-37
  6.1 材料和方法  32-33
    6.1.1 供试材料  32
    6.1.2 菌株CF4-51代谢气体对核盘菌的抑制测定  32
    6.1.3 挥发性物质对离体叶片抑菌作用  32
    6.1.4 挥发物质的收集与GC-MS测定  32-33
    6.1.5 挥发性物质抑菌平板测定  33
  6.2 结果与分析  33-36
    6.2.1 菌株CF4-51代谢气体对核盘菌菌丝的抑制  33
    6.2.2 挥发性物质对离体叶片抑菌作用  33-35
    6.2.3 挥发物质GC-MS鉴定  35-36
  6.3 结论与讨论  36-37
7 菌核活力与菌核埋藏时间和埋藏深度的相关性研究  37-41
  7.1 材料和方法  38
    7.1.1 实验材料  38
    7.1.2 菌核埋藏  38
    7.1.3 菌核测定  38
      7.1.3.1 菌核干重测定  38
      7.1.3.2 菌核萌发活力测定  38
  7.2 结果与分析  38-40
    7.2.1 不同地区菌核萌发活力比较  38-39
    7.2.2 不同地区菌核净重比较  39-40
  7.3 结论与讨论  40-41
8 冬闲大水灌溉对菌核病发生的影响  41-43
  8.1 材料和方法  42
    8.1.1 供试品种  42
    8.1.2 实验设计  42
    8.1.3 实验调查  42
  8.2 结果与分析  42
    8.2.1 向日葵菌核病的发生与灌水的关系  42
  8.3 结论与讨论  42-43
9 结论  43-45
致谢  45-46
参考文献  46-52
附录  52-53
作者简介  53

向日葵菌核病生防菌的筛选鉴定及其综合防治

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