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松材线虫威海群体的发生特点、病原鉴定及药剂毒杀行为研究

作　者: 谭晴晴
导　师: 吴海燕; 姜淑霞
学　校: 山东农业大学
专　业: 植物病理学
关键词: 松材线虫鉴定山东省毒力测定运动行为
分类号: S763
类　型: 硕士论文
年　份: 2012年
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内容摘要

2010年3月-10月对山东省威海市成山林场的松材线虫病发生进行调查,检测其树体内松材线虫的时空动态、分布状况；通过对雌雄成虫的永久玻片和临时玻片的光学显微镜观察、测量和显微镜拍照,对山东省威海成山、烟台长岛和淄博鲁山3个线虫群体形态学和分子生物学鉴定；为了有效的筛选防治松材线虫病药剂,采用生物浸渍法,利用校正死亡率和运动行为量化指标综合评价甲维盐、硫酸铜和苦参碱对Bursaphelenchus xylophilus室内毒力试验结果；同时,研究了甲醇、无水乙醇、丙酮和二甲基亚砜等4种常见溶剂的处理对松材线虫运动行为的影响,为研究杀线剂过程中原药的配制和植物提取液溶剂的使用提供重要的生物学信息。本研究获得结果如下：1.山东省威海市成山林场松材线虫群体消长动态规律2010年3月-10月对山东省威海市成山林场的松材线虫病发生进行监测。结果发现,7月-10月松材线虫的发生达到高峰期,树皮内松材线虫的数量明显高于树体其他部位。病木树皮内松材线虫的数量,树梢明显高于基部,树中下部是最少的；病树上松材线虫在距离地面0-1.2m及4.0-4.8m处松材线虫的数量明显的高于其他部位的数量,其他部位松材线虫的数量没有显著的差异；树体的不同方位松材线虫数量不同。2.山东省威海、烟台、淄博3个群体线虫的形态学和分子生物学鉴定威海成山、烟台长岛和淄博鲁山3个线虫群体共同的形态特征为：雌雄虫呈蠕虫形,虫体细长。唇区高,缢缩显著。口针比模式种稍短,基部微增厚。中食道球卵圆形,占体宽的2/3,瓣膜明显。阴门位于虫体中后部大约75%处,上面覆以宽的阴门盖。雄虫的交合刺大,弓状,成对,喙突显著,远端膨大如盘。3个群体的形态区别为：威海成山和烟台长岛群体的线虫雌虫的尾部呈宽圆形,无尾尖突；雄虫尾部像腹部弯曲,无交合伞包被。淄博鲁山群体雌虫尾部有极短的尾尖突,雄虫尾部端生卵形交合伞。利用特异引物PCR扩增和ITS-RFLP技术,并通过5种限制性内切酶酶切和同源性序列比对。鉴定3个群体线虫均为松材线虫Bursaphelenchus xylophilus (Steiner&Buhrer,1934)Nickle,1970)。3.药剂和溶剂处理对松材线虫运动行为的影响供试药剂处理线虫后,随着暴露时间的延长VAA值逐渐降低,硫酸铜和甲维盐分别在浓度为100mg/1处理8h和浓度为2mg/1处理2h时只有极少数的线虫仅头尾部微弱的摆动,其他的线虫均丧失活性。苦参碱在1000mg/1处理8h时线虫的活性降低,虽然都有活性,但90%身体卷曲,只有1/2线虫头尾部摆动缓慢。甲醇、无水乙醇、甲基亚砜、丙酮在1%浓度下处理不同的时间,线虫VAA值发生一定变化,但不显著,3%时,行为变化明显(P<0.05),5%和10%浓度处理的线虫,其VAA值随着暴露时间的延长而降低,对行为影响显著(P<0.01)。4.药剂对松材线虫的室内毒力测定供试的3种药剂中,硫酸铜和甲维盐在较低的浓度下有较强的毒杀活性。硫酸铜在浓度100mg/1时,24h后校正死亡率达到100%,LCso值在8h、24h、48h和72h分别为31.6342,7.3527,6.5574和5.5678mg/l。甲维盐浓度2mg/1时,2h后线虫校正死亡率达到94.47%。LCso值在5h、24h、48h和72h分别为0.8407,0.2068,0.0369和0.0354mg/1。

全文目录

中文摘要  7-9
Abstract  9-12
1. 前言  12-23
  1.1 松材线虫的生物学特性  13-16
    1.1.1 危害症状和寄主范围  13
    1.1.2 松材线虫的传播  13
    1.1.3 松材线虫病发生条件及损失  13-14
    1.1.4 生活史  14
    1.1.5 松材线虫的鉴定  14-16
  1.2 松材线虫致病机制的研究进展  16
  1.3 松材线虫的防治  16-20
    1.3.1 加强病害的检疫  16-17
    1.3.2 农业措施  17
    1.3.3 选择培育抗病品种,营造混交林  17
    1.3.4 化学防治  17-18
    1.3.5 松树伐桩  18
    1.3.6 生物防治  18-20
  1.4 关于植物寄生线虫行为学研究现状  20-21
    1.4.1 药剂处理后线虫运动行为研究  20
    1.4.2 松材线虫行为学研究进展  20-21
  1.5 松材线虫风险分析  21-22
  1.6 本研究的课题意义  22-23
2 材料与方法  23-34
  2.1 山东省威海市成山林场松材线虫消长动态规律  23-24
    2.1.1 试验地概况  23
    2.1.2 调查时间  23-24
    2.1.3 试验方法  24
  2.2 山东省威海、烟台、淄博3个群体线虫的形态学和分子生物学鉴定  24-31
    2.2.1 样品采集地概况  24
    2.2.2 采集地病木的病情描述  24-25
    2.2.3 供试线虫及试剂  25
    2.2.4 线虫DNA的提取及引物设计  25-26
    2.2.5 试验方法  26-31
  2.3 药剂和溶剂处理对松材线虫运动行为的影响  31-33
    2.3.1 供试材料  31
      2.3.1.1 松材线虫的培养  31
    2.3.2 试验方法  31-33
    2.3.3 数据处理  33
  2.4 药剂对松材线虫的室内毒力测定  33-34
    2.4.1 试验材料  33
    2.4.2 生物学测定  33-34
3 结果与分析  34-56
  3.1 山东省威海市成山林场松材线虫消长动态规律  34-38
    3.1.1 各个时期松材线虫的情况  34-36
    3.1.2 树皮内松材线虫的发生  36
    3.1.3 病木距地面不同距离树体内线虫的数量研究  36-37
    3.1.4 病木不同方位树体内线虫的分布  37-38
    3.1.5 树皮与树体内松材线虫数量  38
  3.2 山东省威海、烟台、淄博3个群体线虫的形态学和分子生物学鉴定  38-46
    3.2.1 供试松材线虫群体的形态测量  38-40
    3.2.2 分子鉴定  40
    3.2.3 各虫体的形态特征  40-41
    3.2.4 种的鉴定  41-46
  3.3 药剂和溶剂处理对松材线虫运动行为的影响  46-52
    3.3.1 硫酸铜处理后松材线虫的行为  46-47
    3.3.2 甲维盐处理后松材线虫的行为  47-48
    3.3.3 苦参碱处理后松材线虫的行为  48
    3.3.4 甲醇处理后松材线虫的行为  48-49
    3.3.5 二甲基亚砜处理后松材线虫的行为  49-50
    3.3.6 无水乙醇处理后松材线虫的行为  50
    3.3.7 丙酮处理后松材线虫的行为  50-51
    3.3.8 4种溶剂不同处理时间对线虫运动行为影响  51-52
  3.4 药剂对松材线虫的室内毒力测定  52-56
    3.4.1 硫酸铜毒杀B.xylophilus的死亡率和活性  52-53
    3.4.2 甲维盐毒杀B.xylophilus的死亡率和活性  53-54
    3.4.3 苦参碱的毒杀B.xylophilus的死亡率和活性  54-56
4 讨论  56-61
  4.1 山东省威海市成山林场松材线虫消长动态规律  56
  4.2 山东省威海、烟台、淄博3个群体线虫的形态学和分子生物学鉴定  56-58
  4.3 药剂和溶剂处理对松材线虫运动行为的影响  58-59
  4.4 药剂对松材线虫的室内毒力测定  59-61
5 结论  61-63
  5.1 山东省威海市成山林场松材线虫消长动态规律  61
  5.2 山东省威海、烟台、淄博3个群体线虫的形态学和分子生物学鉴定  61
  5.3 药剂和溶剂处理对松材线虫运动行为的影响  61
  5.4 药剂对松材线虫的室内毒力测定  61
  5.5 本研究的创新点  61-63
参考文献  63-75
致谢  75-76
研究生期间发表论文  76

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