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金叶女贞新病害—黑斑病的病原鉴定及其防治研究

作　者: 王坦
导　师: 黄思良; 黎起秦
学　校: 广西大学
专　业: 植物病理学
关键词: 金叶女贞黑斑病细交链孢菌鉴定生物防治化学防治
分类号: S436.8
类　型: 硕士论文
年　份: 2012年
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内容摘要

金叶女贞是园林绿化中重要的观赏树种,近年河南省南阳市金叶女贞严重发生一种新的真菌性病害——黑斑病,导致叶子严重脱落。为了明确该病的病原菌,寻找有效的防治措施,作者对病原菌进行了分离纯化,根据柯赫法则对两株代表菌株的致病性进行了确认,并研究了病原菌的部分生物学特性,同时根据形态特征和核糖体基因内转录间隔区(rDNA-ITS)序列对病原菌进行了鉴定,探讨了病害的生物防治与化学防治方法,主要研究结果如下：1、根据病原菌形态、致病性,结合rDNA-ITS序列分析,将病原菌鉴定为细交链孢菌Alternaria alternata (Fr.:Fr.) Keissler。该病菌生长最适温度为25～28℃；适宜生长的pH范围为4～9；能有效利用供试12种碳源,其中以木糖、葡萄糖最好；能利用供试8种氮源,以DL-丙氨酸、甘氨酸最适。产胞外酶能力测定结果表明,菌株可产生脂肪酶、纤维素酶、淀粉酶,不产生蛋白酶。2、从金叶女贞健康植株体内分离得到290株内生细菌菌株,其中对金叶女贞黑斑病菌具有拮抗活性的有46株,内生拮抗菌的分离率为15.9%。内生菌株A71、C108对病原菌生长的抑制作用较强。通过菌株的形态学特征、生理生化试验结果、16SrDNA序列同源性及系统发育树的分析结果,将菌株A71鉴定为洋葱伯克霍尔德氏菌(Burkholderia cepacia)。菌株A71、C108在pH为6～9和25～30℃温度条件下生长较好。菌株A71可利用所有11种供测碳源,而菌株C108不能利用木糖、木糖醇、甘露醇、D-果糖、L-阿拉伯糖。菌株A71、C108均能利用所有测试氮源,包括牛肉膏、酵母膏、硝酸钾、硫酸铵等。3、室内毒力测试结果表明,75%百菌清可湿性粉剂对金叶女贞黑斑病菌的抑制中浓度(ECso值)为2.34mg/mL；70%代森锰锌可湿性粉剂的ECso值为2.23mg/mL。田间药剂试验表明,混配药剂代森锰锌(1400g a.i./ha)+百菌清(750g a.i./ha)的防治效果最好,可达64.96%。菌株A71、C108对金叶女贞黑斑病的田间防治效果分别为54.1%和54.9%。

全文目录

摘要  4-6
Abstract  6-11
1 前言  11-19
  1.1 金叶女贞的价值  11
  1.2 金叶女贞病害的研究进展  11-13
  1.3 链格孢属真菌及其病害的研究进展  13-18
    1.3.1 链格孢属真菌引起的植物病害  13-15
    1.3.2 链格孢属真菌的分类  15-16
    1.3.3 细交链孢菌的形态特征  16-17
    1.3.4 链格孢属真菌病害的化学防治  17
    1.3.5 链格孢属真菌病害的生物防治  17-18
  1.4 本研究的目的和意义  18-19
2 材料与方法  19-36
  2.1 材料  19-21
    2.1.1 供试农药  19
    2.1.2 供试培养基  19-20
    2.1.3 主要溶液、缓冲液和试剂  20-21
    2.1.4 主要实验仪器  21
  2.2 方法  21-36
    2.2.1 金叶女贞黑斑病的调查与样品采集  21-22
    2.2.2 病原菌的分离与纯化及致病性测定  22
    2.2.3 病原菌鉴定  22-25
    2.2.4 病原菌的部分生物学特性测定  25-26
    2.2.5 寄主范围测定  26-27
    2.2.6 病原菌胞外酶活性测定  27-28
      2.2.6.1 脂肪酶  27
      2.2.6.2 蛋白酶  27
      2.2.6.3 纤维素酶  27-28
      2.2.6.4 淀粉酶  28
    2.2.7 金叶女贞内生菌的分离与拮抗性活性检测  28-29
      2.2.7.1 标本的采集  28
      2.2.7.2 内生菌的分离  28
      2.2.7.3 内生菌的洁抗活性测试  28-29
    2.2.8 金叶女贞内生菌的抗菌谱测定  29
    2.2.9 金叶女贞内生菌的胞外酶活性测定  29-30
    2.2.10 金叶女贞内生菌的部分生物学特性测定  30
      2.2.10.1 碳源的利用  30
      2.2.10.2 氮源的利用  30
      2.2.10.3 最适生长温度  30
      2.2.10.4 最适生长pH值  30
    2.2.11 内生菌的定殖试验  30-31
    2.2.12 内生菌的鉴定  31-34
      2.2.12.1 常规鉴定  31-32
      2.2.12.2 分子鉴定  32-34
    2.2.13 化学防治  34-35
      2.2.13.1 杀菌剂室内抑菌活性测定  34-35
      2.2.13.2 杀菌剂防治效果试验  35
    2.2.14 内生菌的防治效果试验  35-36
3 结果与分析  36-60
  3.1 金叶女贞黑斑病病原鉴定及其部分生物学特性  36-47
    3.1.1 田间病害调查及发病症状  36-37
    3.1.2 病原菌的鉴定  37-41
      3.1.2.1 形态学鉴定  37-39
      3.1.2.2 分子鉴定  39-41
    3.1.3 病原菌的部分生物学特性  41-44
      3.1.3.1 不同培养基对病原菌生长及产孢的影响  41
      3.1.3.2 最适生长温度  41
      3.1.3.3 最适生长pH  41-42
      3.1.3.4 碳源的利用  42-43
      3.1.3.5 氮源的利用  43-44
    3.1.4 病原菌寄主范围  44-45
    3.1.5 病原菌胞外酶活性  45-47
  3.2 金叶女贞内生菌的分离及筛选  47-53
    3.2.1 内生菌的分离及其对金叶女贞黑斑病菌的拮抗活性  47-48
    3.2.2 内生菌的抗菌谱  48-49
    3.2.3 内生菌的胞外酶活性  49-50
    3.2.4 内生菌的部分生物学特性  50-53
      3.2.4.1 最适生长温度  50-51
      3.2.4.2 最适生长pH  51-52
      3.2.4.3 碳源的利用  52
      3.2.4.4 氮源的利用  52-53
  3.3 内生菌的定殖  53
  3.4 内生菌的鉴定  53-57
    3.4.1 菌株A71的形态学特征  53
    3.4.2 菌株A71的生理生化反应  53-54
    3.4.3 内生菌的16S rDNA序列分析  54-57
  3.5 杀菌剂及内生菌对金叶女贞黑斑病的防治效果  57-60
    3.5.1 杀菌剂室内毒力  57-58
    3.5.2 杀菌剂的防治效果  58
    3.5.3 内生菌的防治效果  58-60
4 结论与讨论  60-63
  4.1 病害的发生  60
  4.2 病原菌的鉴定与生物学特性  60-61
  4.3 金叶女贞内生菌的生物学特性  61
  4.4 内生菌的鉴定  61-62
  4.5 内生菌的防治效果  62-63
致谢  63-64
参考文献  64-73
附录  73-80

金叶女贞新病害—黑斑病的病原鉴定及其防治研究

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