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解淀粉芽孢杆菌J5防治桃流胶病的研究

作　者: 文生巧
导　师: 程家森
学　校: 华中农业大学
专　业: 植物病理学
关键词: 桃流胶病病害调查内生细菌生物防治抗生素标记分离检测
分类号: S476.11
类　型: 硕士论文
年　份: 2013年
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内容摘要

桃(Prunus persica L.)流胶病(peach tree gummosis disease)是桃树栽培中的常见病害。目前,我国报道的侵染性桃树流胶病病原真菌为Botryosphaeria dothidea (Moug.) Ces.&De Not.,属于葡萄座腔菌属(Botryosphaeria)真菌。桃流胶病主要为害枝干,使发病部位树皮开裂,产生胶状溢出物,其防治工作非常困难。本研究调查了2010年到2012年华中农业大学标本园的桃流胶病发生情况,并以本实验室分离得到的桃树内生细菌解淀粉芽孢杆菌J5为研究对象,进行了桃流胶病生物防治的初步研究,主要结果如下：通过连续三年的病情调查,初步探讨桃流胶病的病害流行规律。华中农业大学标本园桃流胶病发病情况比较严重,在3大类30个不同的桃品种发病情况不同,其严重度表现为油桃>普通桃>蟠桃。在调查的时间段(4月-10月)内,病情指数维持在20-50之间,发病率在80%左右,在7月中下旬至八月上旬,发病率和病情指数有小幅下降。我们以实验室前期分离获得的内生细菌J5为研究对象,首先测定了该菌株的抗真菌谱,发现J5的发酵滤液能抑制包括桃流胶病菌在内的多种病原真菌的生长。采用室内枝条接种的方式,检测了J5抑制桃流胶病发生的效果,结果表明J5处理能有效抑制桃枝条流胶病的发生。对菌株J5的发酵滤液中起到拮抗桃流胶病原真菌的物质用不同的有机溶剂进行了萃取,发现四氯化碳萃取后的有机相中含有抑菌成分,为之后的研究中可能进行到的鉴定工作奠定基础。同时,对菌株J5的内生性进行了验证。用抗生素(利福平)筛选标记J5菌株,注射到桃树上,10个月后采集不同部位样本,分离出标记的J5菌株。目前有关桃流胶病生物防治的研究报道比较少,本文初步研究了通过内生性细菌J5对桃流胶病进行生物防治的工作果,为桃流胶病生物防治途径的研究提供了一些参考。

全文目录

摘要  7-8
Abstract  8-9
第一章文献综述  9-19
  1 利用内生细菌进行生物防治的研究概况  9-13
    1.1 植物内生细菌概述  9-11
    1.2 内生细菌在植物病害防治上的应用  11-13
      1.2.1 内生细菌作为生防菌的优势  11-12
      1.2.2 内生细菌对植物细菌病害的防治作用  12-13
      1.2.3 内生细菌对植物真菌病害的防治作用  13
  2 桃树流胶病研究概况  13-18
    2.1 桃树流胶病的危害  13-14
    2.2 桃流胶病的病原相关研究  14-16
      2.2.1 病原菌  14-15
      2.2.2 桃流胶病致病机理  15-16
      2.2.3 生物学特性  16
    2.3 病害循环及流行规律  16-17
      2.3.1 病原菌侵染  16-17
      2.3.2 流行规律  17
    2.4 桃流胶病的防治  17-18
  3 选题的目的与意义  18-19
第二章桃流胶病病害调查与分析  19-26
  1 材料与方法  19-20
    1.1 田间发病情况调查  19-20
      1.1.1 调查对象  19
      1.1.2 调查分析方法  19-20
      1.1.3 调查时间与频率  20
    1.2 数据统计  20
  2 结果与分析  20-24
    2.1 田间发病症状  20-21
    2.2 田间发病情况调查结果  21-24
      2.2.1 2010年调查结果  21-22
      2.2.2 2011年调查结果  22-23
      2.2.3 2012年调查结果  23-24
  3 小结与讨论  24-26
第三章内生细菌J5对桃流胶病(PEACH GUMMOSIS DISEASE)拮抗效果的相关研究  26-43
  1 材料与方法  26-31
    试验材料  26-28
      1.1.1 供试菌株  26-27
      1.1.2 供试植物  27
      1.1.3 培养基  27
      1.1.4 酶和试剂盒  27
      1.1.5 主要试剂  27
      1.1.6 抗生素  27
      1.1.7 主要仪器  27-28
    试验方法  28-31
      1.2.1 内生细菌J5的抗真菌谱测定  28
      1.2.2 温度处理对J5的发酵滤液抑菌效果的影响  28
      1.2.3 蛋白酶处理对J5的发酵滤液抑菌效果的影响  28
      1.2.4 J5发酵液对JMB-122致病的影响  28-29
      1.2.5 浸泡J5菌液对JMB-122致病的影响  29
      1.2.6 J5注射桃树枝条对JMB-122致病的影响  29
      1.2.7 J5发酵液的有机萃取  29-30
      1.2.8 J5的内生性鉴定  30-31
  2 结果与分析  31-41
    2.1 J5的抗真菌谱测定  31-32
    2.2 温度以及蛋白酶处理对J5的发酵滤液抑菌效果的影响  32-33
    2.3 J5发酵液对JMB-122致病的影响  33-34
    2.4 浸泡J5菌液对JMB-122致病的影响  34-35
    2.5 J5注射桃树枝条对JMB-122致病的影响  35-36
    2.6 J5发酵液有机萃取剂的筛选  36-37
    2.7 J5内生性的鉴定  37-41
      2.7.1 J5的利福平(Rifampicin,Rif)标记  37-38
      2.7.2 利福平标记的J5菌株的分离  38-39
      2.7.3 分离菌株划线与16SrDNA及16-23S rDNA间隔区序列的扩增  39-41
      2.7.4 16SrDNA和16-23SrDNA间隔区序列的测序比对结果  41
  3 小结与讨论  41-43
结论与展望  43-44
参考文献  44-52
致谢  52

解淀粉芽孢杆菌J5防治桃流胶病的研究

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