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濒危植物桃儿七（Sinopodophyllum hexandrum（Royle）Ying）的遗传多样性研究

作　者: 肖猛
导　师: 陈放；王丽
学　校: 四川大学
专　业: 植物学
关键词: 桃儿七 RAPD ISSR AFLP 遗传多样性 遗传结构 保护策略 鬼臼毒素 高效液相色谱 土壤养分因子
分类号: Q943
类　型: 博士论文
年　份: 2006年
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内容摘要


桃儿七（Sinopodophyllum hexandrum（Royle）Ying；分类学上的同种异名有S. emodi（Wall）Ying，Podophyllum hexandrum Royle，P. emodi Wall；又名西藏鬼臼）是小檗科桃儿七属多年生草本植物，也是一种珍稀濒危药用植物。桃儿七主要生长在喜马拉雅及临近地区，分布于尼泊尔、不丹、印度、巴基斯坦、阿富汗与中国。在中国，主要分布在海拔2700到4500米的中国西南的两减、四川、云南，其他的省（自治区）如陕西、甘肃、青海、宁夏以及湖北亦有分布。据我们调查，桃儿七在四川省主要分布于阿坝州、甘孜州以及凉山州（仅木里县）等地。桃儿七是一种传统的民间药用植物，其根和根茎中的主要成分之一鬼臼毒素（podophyllotoxin）是人工合成的抗癌药物(VP16，依托泊苷；VM26，特尼泊苷)的前体。近年来由于人类砍伐等干扰活动加剧，桃儿七生境受到破坏，加上根茎可入药，采挖过量，致使种群数量迅速减少，已被国家列为三级保护植物。因此很有必要进行桃儿七保护遗传学研究，探讨它的濒危机制。 濒危物种保护遗传学的首要目标是评价遗传多样性水平和结构分布。有关桃儿七遗传多样性的研究，先前的工作主要集中在细胞学方面。本研究从DNA

全文目录


图片目录  9-10
表格目录  10-11
中文摘要  11-14
英文摘要  14-18
第一章 桃儿七居群遗传多样性的RAPD分析  18-39
  摘要  18
  引言  18-21
  1 材料与方法  21-26
    1.1 实验材料  21
    1.2 试验方法  21-26
      1.2.1 DNA的提取与检测  21-24
        1.2.1.1 DNA的提取  21-23
        1.2.1.2 DNA的检测  23-24
      1.2.2 RAPD扩增  24-25
      1.2.3 RAPD扩增产物检测  25
      1.2.4 数据的统计分析  25-26
  2 结果与分析  26-32
    2.1 DNA提取与检测  26-27
    2.2 RAPD扩增结果  27-28
    2.3 RAPD遗传多样性分析  28-29
    2.4 居群遗传结构分析  29-30
    2.5 遗传距离和聚类分析  30-32
  3 讨论  32-35
    3.1 RAPD实验的稳定性  32-33
    3.2 桃儿七的遗传多样性  33-34
    3.3 桃儿七居群的遗传结构  34-35
    3.4 桃儿七遗传多样性的保护策略  35
  参考文献  35-39
第二章 桃儿七居群遗传多样性的ISSR分析  39-54
  摘要  39
  引言  39-40
  1 材料与方法  40-42
    1.1 实验材料  40
    1.2 试验方法  40-42
      1.2.1 DNA的提取  40
      1.2.2 ISSR扩增  40-41
      1.2.3 ISSR扩增产物检测  41-42
      1.2.4 数据统计分析  42
  2 结果与分析  42-48
    2.1 ISSR扩增结果  42-45
    2.2 ISSR遗传多样性分析  45-46
    2.3 居群遗传结构分析  46
    2.4 遗传距离和聚类分析  46-48
  3 讨论  48-50
    3.1 ISSR实验的稳定性  48
    3.2 桃儿七的遗传多样性  48-49
    3.3 桃儿七居群的遗传结构  49
    3.4 桃儿七遗传多样性的保护策略  49-50
  参考文献  50-54
第三章 桃儿七居群遗传多样性的AFLP分析  54-86
  摘要  54
  引言  54-55
  1 材料与方法  55-63
    1.1 实验材料  55
    1.2 试验方法  55-63
      1.2.1 DNA的提取  56
      1.2.2 AFLP扩增程序  56
      1.2.3 AFLP扩增实验条件的优化  56-61
        1.2.3.1 双酶切  57
        1.2.3.2 连接  57
        1.2.3.3 预扩增  57-58
        1.2.3.4 选择性扩增实验条件的优化  58-61
        1.2.3.5 选择性扩增  61
      1.2.4 扩增产物的变性聚丙烯酰胺凝胶电泳分析  61-62
      1.2.5 数据分析  62-63
  2 结果与分析  63-73
    2.1 AFLP实验条件优化  63-68
      2.1.1 模板浓度的影响  63
      2.1.2 酶切  63-64
      2.1.3 预扩增  64-65
      2.1.4 选择性扩增实验体系的确立  65-68
        2.1.4.1 选择性扩增条件的筛选  65-66
        2.1.4.2 选择性扩增引物的筛选  66-68
    2.2 AFLP遗传多样性分析  68-70
    2.3 居群遗传结构的分析  70-71
    2.4 遗传距离和聚类分析  71-73
  3 讨论  73-80
    3.1 AFLP实验条件的优化  73-74
    3.2 桃儿七的遗传多样性  74-75
    3.3 桃儿七居群的遗传结构  75-76
    3.4 RAPD、ISOR和AFLP标记结果比较  76-78
    3.5 桃儿七遗传多样性的保护策略与措施  78-80
      3.5.1 实施原位保护策略  79
      3.5.2 实施迁地保护策略  79
      3.5.3 保护和重建桃儿七的适宜生境  79-80
      3.5.4 采取其他替代性保护策略  80
  参考文献  80-86
第四章 桃儿七鬼臼毒素含量变化研究  86-103
  摘要  86
  引言  86-87
  1 材料、仪器与方法  87-91
    1.1 实验材料  87-88
    1.2 仪器与试剂  88
    1.3 试验方法  88-91
      1.3.1 鬼臼毒素的提取  88
      1.3.2 鬼臼毒素的定性鉴定  88-89
      1.3.3 溶液配制  89
        1.3.3.1 对照品溶液配制  89
        1.3.3.2 供试品溶液配制  89
      1.3.4 色谱条件的确定  89
      1.3.5 鬼臼毒素含量的测定  89-90
        1.3.5.1 标准曲线的制作  89
        1.3.5.2 进样精密度试验  89
        1.3.5.3 溶液稳定性试验  89-90
        1.3.5.4 重复性试验  90
        1.3.5.5 回收率试验  90
        1.3.5.6 样品中鬼臼毒素含量的测定  90
      1.3.6 土壤分析  90-91
        1.3.6.1 土壤水分的测定  90
        1.3.6.2 土壤pH值的测定  90
        1.3.6.3 土壤养分含量的测定  90-91
      1.3.7 数据统计分析  91
  2 结果与分析  91-96
    2.1 鬼臼毒素的定性鉴定  91
    2.2 色谱条件  91-92
    2.3 标准曲线、进样精密度、溶液稳定性、重复性及回收率试验  92-93
    2.4 不同产地桃儿七样品鬼臼毒素的含量  93-94
    2.5 不同生长季节桃儿七样品鬼臼毒素的含量  94
    2.6 土壤因子对桃儿七鬼臼毒素含量的影响  94-96
  3 讨论  96-100
    3.1 桃儿七鬼臼毒素的提取及检测  96-97
    3.2 不同产地和生长季节桃儿七鬼臼毒素含量的变化  97-98
    3.3 桃儿七鬼臼毒素含量与土壤因子之间的关系  98-100
  参考文献  100-102
  结论  102-103
文献综述  103-131
  第五章 植物遗传多样性及其保护研究进展  103-131
    1 遗传多样性研究  103-108
      1.1 遗传多样性研究的意义  103-104
      1.2 遗传多样性与遗传结构  104
        1.2.1 遗传多样性的概念  104
        1.2.2 居群的遗传结构  104
      1.3 影响物种遗传变异和遗传结构的因素  104-108
        1.3.1 影响物种遗传变异大小的因素  104-105
        1.3.2 影响物种遗传结构的因素  105-108
    2 遗传多样性保护  108-117
      2.1 保护遗传学研究概况  108
      2.2 保护遗传学在濒危植物研究中的应用  108-111
        2.2.1 濒危物种的遗传多样性  108-109
        2.2.2 植物濒危的因素  109-110
        2.2.3 保护单元的确定  110
        2.2.4 保护策略的制定  110-111
      2.3 遗传多样性研究方法及其进展  111-117
        2.3.1 蛋白质标记  112-113
        2.3.2 DNA标记  113-117
          2.3.2.1 限制性片段长度多态性  113
          2.3.2.2 随机扩增多态性DNA  113-114
          2.3.2.3 扩增片段长度多态性  114-115
          2.3.2.4 微卫星  115
          2.3.2.5 微卫星间隔  115-116
          2.3.2.6 DNA序列分析  116-117
    3 桃儿七的研究进展  117-121
      3.1 地理分布与系统发育  117-118
      3.2 生物学特性  118
      3.3 经济价值  118-120
      3.4 遗传多样性分子标记研究  120
      3.5 有效成分(鬼臼毒素)分离纯化与含量检测  120-121
    参考文献  121-131
致谢  131-132
在读期间发表及待发表的论文情况  132-134

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中图分类: > 生物科学 > 植物学 > 植物细胞遗传学
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