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EGCG调控TGF-β1诱导的头颈鳞癌细胞上皮—间质转化的实验研究

作　者: 皮雷鸣
导　师: 张欣
学　校: 中南大学
专　业: 耳鼻咽喉科
关键词: 头颈鳞癌 转化生长因子-β1 上皮-间质转化 EGCG Smad7
分类号: R285
类　型: 硕士论文
年　份: 2011年
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内容摘要


目的：头颈鳞癌是世界第六大常见恶性肿瘤,其患者的五年生存率近年来没有得到明显改善,主要在于肿瘤的早期转移,而TGF-β通路介导的上皮-间质转化(Epithelial mesenchymal transition, EMT)在其间发挥了重要作用。表没食子儿茶素没食子酸酯(Epigallocaechin-3-gallate, EGCG)是绿茶中茶多酚类的主要成分,其抗肿瘤作用涵盖肿瘤的生长、发展、侵袭、迁移等多个方面。研究表明,EGCG一方面能逆转肿瘤细胞EMT的发生,另一方面能通过Smad7调控TGF-β通路。目前,关于EGCG对头颈鳞癌EMT影响的报道甚少。因此,本研究拟在头颈鳞癌体外实验中阐明EGCG能逆转TGF-β1刺激诱导的EMT,并初步探讨该过程中Smad7的变化。方法：(1)以5ng/ml TGF-β1刺激Tu686细胞,构建EMT模型；(2)在此模型中,用不同浓度(0、10、20、30μM)的EGCG刺激细胞24小时后,用RT-PCR和Western-Blot检测上皮细胞标志物E-cadherin和间质细胞标志物Vimentin的表达,同时检测TGF-β通路中Smad7的表达；(3)用浓度为20μM的EGCG刺激细胞后,于不同的时间点(6、12、24小时)收集细胞,检测E-cadherin及Vimentin的表达；(4)用5ng/ml的TGF-β1刺激Tu686细胞24小时后,再加入浓度为20μM的EGCG处理24小时,观察这一过程中细胞形态及细胞间连接的变化。结果：(1)TGF-β1刺激Tu686细胞后,EMT标志物E-cadherin的表达下调,而Vimentin的表达则增强,并且细胞形态发生相应改变,TGF-β1介导的Tu686细胞EMT模型构建成功；(2)在EMT模型中,EGCG能有效的抑制EMT的发生,且E-cadherin的表达上调及Vimentin的表达下降；(3)EGCG能上调EMT模型中Smad7的mRNA及蛋白的水平。结论：(1)EGCG能抑制TGF-β1介导的头颈鳞癌细胞株Tu686 EMT的发生；(2)该抑制作用可能与TGF-β通路中抑制性因子Smad7的上调有关。

全文目录


摘要  4-6
ABSTRACT  6-9
专业名词缩写中英文对照表  9-10
第一章 前言  10-13
第二章 材料与方法  13-22
  2.1 主要实验仪器  13-14
  2.2 主要实验材料  14
  2.3 细胞培养  14-15
  2.4 头颈鳞癌细胞株Tu686的形态学观察  15-16
  2.5 细胞准备  16
  2.6 蛋白质印迹(Western Blot)  16-19
  2.7 半定量RT-PCR  19-22
第三章 结果  22-30
  3.1 EGCG对头颈鳞癌Tu686细胞形态的影响  22
  3.2 RT-PCR结果  22-24
    3.2.1 RNA质量验证  22
    3.2.2 EMT模型中,E-cadherin和Vimentin的mRNA表达  22-23
    3.2.3 EGCG影响Tu686细胞E-cadherin和Vimentin的mRNA表达  23
    3.2.4 EMT模型中,Smad7的mRNA表达  23
    3.2.5 EGCG对Smad7的mRNA表达的影响  23-24
  3.3 Western Blot结果  24-26
    3.3.1 EMT模型中,E-cadherin和Vimentin蛋白的表达  24
    3.3.2 EGCG影响Tu686细胞E-cadherin和Vimentin的蛋白表达  24-25
    3.3.3 EMT模型中,Smad7蛋白的表达  25
    3.3.4 EGCG对Smad7蛋白表达的影响  25-26
  3.4 附图  26-30
第四章 讨论  30-35
  4.1 EGCG能调控TGF-β1诱导的头颈鳞癌细胞EMT  30-32
  4.2 TGF-β通路与EGCG调控头颈鳞癌EMT的关系  32-34
  4.3 本研究的意义  34
  4.4 展望  34-35
第五章 结论  35-36
参考文献  36-41
综述  41-60
  参考文献  51-60
致谢  60

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中图分类: > 医药、卫生 > 中国医学 > 中药学 > 中药药理学
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