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二甲双胍、瑞格列奈对糖尿病小鼠肾脏TGF-β1mRNA表达的影响

作　者: 杨芳
导　师: 金秀平
学　校: 河北联合大学
专　业: 内分泌与代谢病
关键词: 糖尿病肾病二甲双胍瑞格列奈转化生长因子-β1
分类号: R587.1
类　型: 硕士论文
年　份: 2011年
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内容摘要

糖尿病肾病(diabetic nephropathy,DN)是糖尿病常见的微血管并发症,是导致终末期肾功能衰竭的主要原因。糖尿病患者中有20%-40%发生DN。DN早期病理特征是肾小球肥大、基底膜增厚和肾小球系膜区细胞外基质(extracellular matrix,ECM)堆积,晚期则表现为肾小球硬化和间质纤维化。DN的病因和发病机制至今尚未完全阐明,转化生长因子-β1(transforming growth factor-β1,TGF-β1)被认为是糖尿病肾病发病的“最终共同通路”,阻断这一通路就可以阻断肾脏病变。二甲双胍和瑞格列奈是临床上常用的降血糖药物,二甲双胍90%以原型经肾脏排泄,而瑞格列奈从肾脏排泄的少于8%,这两种药物对糖尿病时肾组织及其TGF-β1mRNA表达的影响,目前研究很少。本实验比较了二甲双胍和瑞格列奈对糖尿病小鼠肾组织TGF-β1mRNA表达及肾脏组织病理学改变的影响。目的:比较二甲双胍和瑞格列奈对糖尿病小鼠肾损害及肾脏TGF-β1mRNA表达的影响。方法:1.将40只健康雄性C57小鼠随机分正常对照组10只,造模组30只,正常对照组喂以常规饲料,造模组喂以高脂饲料8周后,禁食12 h,一次性腹腔注射0.1mol/L柠檬酸钠缓冲液配置的链脲佐菌素(Streptozotocin,STZ)80mg/kg,正常对照组腹腔内注入等容积的0.1mol/l柠檬酸-柠檬酸钠缓冲液。72 h后用血糖试纸法测尾血血糖,随机血糖≥16.7mmol/L者为糖尿病模型,将造模成功的30只小鼠随机分为糖尿病组10只、二甲双胍治疗组10只、瑞格列奈治疗组10只。2.每天早9点开始给小鼠灌胃,药品溶于蒸馏水中,二甲双胍治疗组予二甲双胍溶液(按300mg/kg计算,用0.1ml蒸馏水稀释)灌胃,瑞格列奈治疗组予瑞格列奈溶液(按2mg/kg计算,用0.1ml蒸馏水稀释)灌胃,正常组及糖尿病组予等容积的蒸馏水灌胃,在灌胃过程中两用药组各死亡1只。每日观察小鼠饮食、饮水量、精神状态、活动情况、大便性状及尿量。治疗8周末测量各组小鼠血糖、体重,处死各组小鼠,取左肾,留取100 mg肾皮质立即投入液氮中,采用实时荧光定量PCR(real time-PCR)法检测各组小鼠肾脏TGF-β1 mRNA的表达水平。其余部分制成冰冻切片及石蜡切片,行苏木素-伊红(HE)、天狼猩红(VG)、过碘酸酸雪夫(PAS)三色染色,光镜下观察各组小鼠肾脏组织学改变,利用自动图像分析系统进行半定量分析比较各组胶原面密度;每份标本取相同肾切面,在不同视野数30个肾小球,确定每个肾小球PAS染色级别。3.统计学方法:应用SPSS13.0统计软件包进行统计分析,采用重复测量方差分析(Reperted measurement experiment)、单因素方差分析(One-Way ANOVA)、χ2检验(Chi-square test),以P<0.05为差异有统计学意义。结果:1.血糖、体重变化:治疗前,糖尿病组、二甲双胍组及瑞格列奈组血糖及体重均比正常组明显升高(P<0.01)。治疗后二甲双胍组及瑞格列奈组血糖均比治疗前明显下降(P<0.01),且二甲双胍组血糖比瑞格列奈组下降更明显(P<0.01);治疗后糖尿病组体重较治疗前明显下降(P<0.05),二甲双胍组及瑞格列奈组体重下降较糖尿病组均明显减轻(P<0.01),瑞格列奈组体重下降比二甲双胍组下降更明显(P<0.01)。2.光镜下病理切片观察:正常组小鼠肾小球结构正常,未见系膜细胞及基质增生,未见肾小球基底膜及系膜PAS阳性物质,毛细血管腔开放;而糖尿病组肾小球固有细胞数目及基质增多,毛细血管管腔狭窄,部分肾小球出现明显的分叶、硬化。VG染色可见基底膜及肾间质胶原纤维增多、排列紊乱,被染成鲜红色。毛细血管壁和系膜区PAS染色呈强阳性,提示肾小球基底膜增厚,系膜基质大量积聚,压迫毛细血管管腔狭窄,甚至闭锁;二甲双胍组及瑞格列奈组小鼠肾小球结构较糖尿病组明显改善,肾小球固有细胞数目增生减轻,系膜增生及基底膜增厚明显减轻,胶原纤维有不同程度的减少,PAS阳性物质均明显减少,其中瑞格列奈组改善最明显。3.Real time-PCR检测显示:与正常组相比,糖尿病组肾脏TGF-β1 mRNA表达明显增加(P<0.01)。二甲双胍组及瑞格列奈组肾脏TGF-β1mRNA表达均较糖尿病组显著减少(P<0.01)。瑞格列奈组较二甲双胍组明显减少(P<0.01)。结论:1.二甲双胍比瑞格列奈更能显著降低糖尿病小鼠的血糖。2.瑞格列奈在改善糖尿病小鼠肾脏病理变化方面优于二甲双胍。3.糖尿病小鼠肾组织TGF-β1mRNA表达明显高于正常组小鼠肾脏,瑞格列奈降低糖尿病小鼠肾脏TGF-β1mRNA的表达作用优于二甲双胍。

全文目录

中文摘要  4-7
英文摘要  7-11
英文缩写  11-12
前言  12-13
材料与方法  13-22
结果  22-26
讨论  26-32
结论  32-33
问题及展望  33-34
参考文献  34-38
附图  38-42
综述 TGF-β1 与糖尿病肾病  42-59
  参考文献  52-59
致谢  59-60
个人简历  60

二甲双胍、瑞格列奈对糖尿病小鼠肾脏TGF-β1mRNA表达的影响

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