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IL21及IL12诱导子宫内膜癌患者PBMCs抗肿瘤活性的研究

作　者: 田永菊
导　师: 崔保霞
学　校: 山东大学
专　业: 妇产科学
关键词: IL21 IL12 PBMCs 细胞毒活性 Treg细胞 Th17细胞 子宫内膜癌
分类号: R737.33
类　型: 硕士论文
年　份: 2011年
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内容摘要


目的：观察IL21及IL12单用或联合应用对子宫内膜癌患者PBMCs抗肿瘤活性的影响,并初步探讨相关机制。方法：收集2010年3月至2010年7月在山东大学齐鲁医院就诊的子宫内膜癌患者外周血标本14例,采用Ficoll密度梯度离心法体外分离得到PBMCs,将细胞悬浮于RPMI1640培养液[含20%FBS、100×青链霉素混合液和IL2 (5 ng/ml)],分5组培养,即对照组(IL2组)、抗IL21 (2μg/ml)组、IL21 (50 ng/ml)组、IL12 (5 ng/ml)组和联合组[IL21 (50 ng/ml) +IL12 (5 ng/ml)]将5组细胞分别接种于6孔板(2×106cells/孔)和96孔板(1×104cells/孔),37℃,5%C02培养箱中培养72h后,用于下述实验。以5组经不同细胞因子处理72h的PBMCs为效应细胞,子宫内膜癌Ishikawa细胞为靶细胞,效靶比为100：1,采用LDH法检测PBMCs对Ishikawa细胞的杀伤活性。每组收集1×106个细胞,充分洗涤、重悬,Treg细胞染色时首先行细胞外抗体染色,然后用Fix/Perm固定和破膜,最后进行细胞内抗体染色；Th17细胞染色时先用PMA (25 ng/ml),离子霉素(1μg/ml)和莫能霉素(1.7μg/ml)在37℃、5%CO2培养箱中培养4.5h,其它步骤同上,采用流式细胞术检测CD4+CD25+FOXP3+T调节性细胞(Treg细胞)和CD4+IL17A+T辅助17细胞(Th17细胞)的含量。96孔板中的5组PBMCs经细胞因子处理72h后,每孔加入10μl的CCK-8溶液,同时设置空白对照组,每组3个复孔,37℃,5%C02培养箱中培养4h,检测PBMCs的增殖能力。收集5组经细胞因子处理72h的PBMCs约1×105个,流式细胞术法检测PBMCs的凋亡率。结果：与对照组相比,IL21组、IL12组和联合组PBMCs对Ishikawa细胞的杀伤活性均显著升高,而且联合组比单用IL21组和IL12组诱导的PBMCs杀伤活性也显著升高(P均<0.01)。进一步研究发现,IL21、IL12及IL21联合IL12分别显著降低了Treg细胞的含量,抑制了PBMCs的凋亡(P均<0.05)。使用抗IL21抗体中和培养体系中IL21的生物活性后,PBMCs的杀伤活性显著降低,Treg细胞的含量显著升高,PBMCs的凋亡率显著升高(P均<0.05),从而进一步证实了IL21的作用。不同细胞因子处理组对Thl7细胞的含量和PBMCs的增殖能力均无显著影响(P均>0.05)。结论：IL21及IL12可增强子宫内膜癌患者PBMCs的细胞毒活性,而且IL21联合IL12能进一步增强PBMCs的细胞毒活性,从而更有效的提高PBMCs的抗肿瘤活性。抑制Treg细胞分化和阻止PBMCs凋亡可能为其机制之一,而与Thl7细胞的分化和PBMCs的增殖无关。本研究为子宫内膜癌的细胞因子免疫治疗提供了依据。

全文目录


中文摘要  6-8
ABSTRACT  8-10
符号说明  10-11
前言  11-13
材料与方法  13-21
实验结果  21-22
讨论  22-26
附图  26-30
结论  30-31
参考文献  31-36
综述  36-47
  参考文献  43-47
致谢  47-48
攻读硕士学位期间发表的文章  48-49
学位论文评阅及答辩情况表  49

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中图分类: > 医药、卫生 > 肿瘤学 > 泌尿生殖器肿瘤 > 女性生殖器肿瘤 > 子宫肿瘤
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