学位论文 > 优秀研究生学位论文题录展示

生育三烯酚通过Wnt信号途径诱导结肠癌细胞死亡的机制研究

作　者: 李大鸣
导　师: 王凤山
学　校: 天津医科大学
专　业: 卫生毒理学
关键词: 生育三烯酚 人结肠癌 SW620细胞 程序性死亡 paraptosis Wnt信号途径
分类号: R735.35
类　型: 硕士论文
年　份: 2011年
下　载: 36次
引　用: 0次
阅　读: 论文下载
 

内容摘要


目的本研究旨在通过体外培养人结肠癌SW620细胞,利用分子生物学实验技术,以Wnt信号途径为中心,探讨生育三烯酚诱导结肠癌细胞发生死亡的分子机制。方法1.生育三烯酚对SW620细胞增殖的影响体外培养SW620细胞,分别加入不同浓度生育三烯酚(δ-生育三烯酚终浓度分别为0、1、2.5、5、10、15、20、25、30和40μmol/L；Υ-生育三烯酚终浓度分别为0、5、10、15、20、25、30、40、50、60、70、80、90和100μmol/L)和乙醇(溶剂对照)作用24 h后,以MTT实验分别观察Υ-、δ-生育三烯酚对SW620细胞存活率的影响。分别以浓度为5、10、15、20μmo1/L的δ-生育三烯酚及15、30、45、60μmol/L的Υ-生育三烯酚和乙醇(溶剂对照)作用于细胞,利用荧光染色(AO/EB染色,DAPI染色)、电镜超微结构观察、流式细胞术、Caspase-3活性测定等方法检测细胞的死亡情况,并比较加入z.VAD.fmk与否时细胞的存活率2.生育三烯酚抑制SW620细胞增殖的机制研究体外培养SW620细胞,分别以浓度为5、10、15、20μmol/L的6-生育三烯酚及15、30、45、60-tmol/L的Υ-生育三烯酚和乙醇(溶剂对照)作用于细胞。24h后,提取细胞内总RNA进行Real-time RT-PCR检测wnt-1、β-catenin、cyclin D1、c-jun、MMP-7的mRNA表达。同时,提取总蛋白进行Westernblot检测上述蛋白的表达情况。结果1.Υ、δ-生育三烯酚分别作用24 h后,与乙醇对照组相比,各剂量组Υ-、6-生育三烯酚均可以使SW620细胞存活率降低(P<0.05),且细胞存活率分别随着Υ-、δ-生育三烯酚剂量的增加呈现降低的趋势。Υ-、6-生育三烯酚对SW620细胞的IC50值分别为31.35μmol/L,15.18μmol/L。2.通过细胞形态学观察发现,Υ-、δ-生育三烯酚分别作用SW620细胞6和24 h后,细胞内未见细胞核不规整,膜泡化,核染色体DNA浓缩、着边呈新月状,凋亡小体形成等典型的凋亡现象,取而代之的是细胞内出现大量空泡。电镜结果显示线粒体发生了肿胀及空泡变。3. Caspase抑制剂z.VAD.fmk加入后,SW620细胞生存率仍随着6-生育三烯酚的剂量增加而呈现下降的趋势(P<0.05),相同剂量组间细胞生存率的差异不具有统计学意义(P>0.05)；6-生育三烯酚分别作用SW620细胞6和24 h后,处理组细胞凋亡率与对照组比较,差异没有统计学意义(P>0.05)；6-生育三烯酚作用SW620细胞24 h后,随作用剂量的增加,Caspase-3活性并未增强(P>0.05)。Υ-生育三烯酚的结果与6-生育三烯酚的结果相类似。4.在不同剂量的δ-生育三烯酚作用24h后,SW620细胞内wnt-1、β-catenin的mRNA和蛋白的表达量下降；对Wnt信号途径下游癌基因cyclin D1、MMP-7的mRNA表达无影响,但是能够降低cyclin、D1、MMP-7蛋白量的水平。5.在不同剂量的Υ-生育三烯酚作用24h后,SW620细胞内(3-catenin、c-jun、cyclinD1的mRNA和蛋白表达量有不同程度的下降；对wnt-1、MMP-7的mRNA表达无影响,但可使其蛋白表达量有不同程度的下降。结论1.证实生育三烯酚抑制SW620细胞增殖。同时,发现δ-生育三烯酚对SW620细胞的抑制作用强于Υ-生育三烯酚。2.生育三烯酚可以诱导SW620细胞产生paraptosis样死亡3.生育三烯酚对Wnt信号途径的影响可能是其诱导SW620细胞paraptosis样死亡的机制之-。

全文目录


中文摘要  4-6
Abstract  6-10
缩略语/符号说明  10-12
前言  12-15
  研究现状、成果  12-14
  研究目的、方法  14-15
一 生育三烯酚对SW620细胞增殖的影响  15-43
  1.1 对象和方法  15-20
    1.1.1 材料  15-16
    1.1.2 实验方法  16-20
    1.1.3 统计学处理  20
  1.2 结果  20-36
    1.2.1 生育三烯酚对细胞生长的影响  20-24
    1.2.2 生育三烯酚对SW620细胞基本形态的影响  24-25
    1.2.3 生育三烯酚对SW620细胞死亡的诱导作用  25-36
  1.3 讨论  36-41
    1.3.1 生育三烯酚对SW620细胞增殖的抑制作用  36-37
    1.3.2 生育三烯酚对SW620细胞死亡的诱导作用  37-41
  1.4 小结  41-43
二 生育三烯酚抑制SW620细胞增殖的机制研究  43-67
  2.1 对象和方法  43-48
    2.1.1 材料  43-44
    2.1.2 实验方法  44-48
    2.1.3 统计学处理  48
  2.2 结果  48-62
    2.2.1 生育三烯酚对SW620细胞Wnt信号途径相关因子mRNA表达的影响  48-55
    2.2.2 生育三烯酚对SW620细胞Wnt信号途径相关因子蛋白水平表达的影响  55-62
  2.3 讨论  62-66
  2.4 小结  66-67
结论  67-68
参考文献  68-77
发表论文和参加科研情况说明  77-78
综述 生育三烯酚抗肿瘤机制研究进展  78-96
  综述参考文献  88-96
致谢  96

相似论文

  1. 黄瓜—酸黄瓜抗霜霉病渐渗系分子标记的筛选及细胞程序性死亡相关基因的表达分析,S436.421.11
  2. 阿斯匹林、姜黄素对人HT-29、SW480细胞中β-catenin、COX-2及PGE2的影响,R735.35
  3. 阿司匹林对人结肠癌细胞株HT-29、SW-480中肿瘤干细胞相关标记物的影响,R735.35
  4. 虎纹捕鸟蛛粗毒对人结肠癌SW480细胞体外增殖的影响,R735.35
  5. 微波消融联合5-FU对小鼠结肠癌移植瘤治疗的实验研究,R735.35
  6. 塞来昔布对人结肠癌细胞系HT-29 MicroRNA表达谱的影响及其机制的实验研究,R735.35
  7. B7-H1/PD-1在人结肠癌中的表达及其与调节性T细胞关系的研究,R392
  8. Smad4失活和KrasG12D活化对结肠癌肝转移的协同效应研究,R735.35
  9. 18F-FDG PET/CT对结肠癌疗效评估与复发转移监测的基础与临床观察,R735.35
  10. HIF-1α、SOCS-3、Bax在心脏性猝死心肌中的表达和甲醛固定石蜡包埋尸检组织中提取DNA的研究,R541
  11. 槲皮素对人大肠癌SW480细胞侵袭及转移作用的体外实验研究,R285
  12. 两株链霉菌属放线菌活性次生代谢产物研究,R91
  13. 结肠癌中肠道干细胞标志Musashi-1的检测,R735.3
  14. 胞嘧啶脱氨酶基因突变体D314A对人结肠癌细胞的抑制作用,R735.35
  15. 结肠癌和直肠癌临床特点及癌变相关分子机制的异同分析,R735.3
  16. p53蛋白表达与结肠癌腹膜转移的关系,R735.2
  17. miR-218在结肠癌中的表达及其调控的靶基因研究,R735.35
  18. AKT2在结肠癌中的表达及其临床意义,R735.35
  19. 结肠腺癌组织中hsp60及nm23蛋白的表达及其相关性研究,R735.35
  20. REV3基因对结肠癌细胞遗传信息表达的影响,R735.35
  21. PAC-1联合MCP对结肠癌细胞的协同杀伤作用及其分子机制研究,R735.35

中图分类: > 医药、卫生 > 肿瘤学 > 消化系肿瘤 > 肠肿瘤 > 结肠肿瘤
© 2012 www.xueweilunwen.com