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脊神经根离断对大鼠烫伤创面愈合速度、愈合质量及神经再生的影响

作　者: 郭鹏飞
导　师: 王一兵；王明青
学　校: 山东大学
专　业: 外科学
关键词: 神经支配创面愈合胶原蛋白瘢痕神经再生
分类号: R644
类　型: 硕士论文
年　份: 2011年
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内容摘要

背景：烧伤创面愈合是一个复杂而有序的生物学过程,包括炎性反应、细胞增殖、创面重塑几个阶段。关于创面愈合涉及的炎症细胞、修复细胞、炎症介质、生长因子和细胞外基质等成分的研究已有大量报道。既往研究证明神经在创伤愈合过程中起着非常重要的作用,研究焦点多集中在神经纤维分泌的神经肽上和创面愈合速度,而神经肽的分泌受多种内分泌因素的影响,不能确切证明神经与创面愈合之间的关系；但有关创面愈合过程中再生神经的形态学及其三维结构、神经调节与创面愈合质量形成之间的关系鲜有报道。目的：我们拟通过动物实验观察去除神经因素后,创面愈合速度和创面愈合质量的的变化情况,初步确定皮肤神经对烫伤创面愈合作用；同时观察烧伤创面愈合过程中的神经变化情况,总结创面愈合过程中神经纤维的变化规律及其可能作用,从而初步探明神经与创面愈合的相互作用,为神经调控对创面愈合影响提供新的依据,同时我们在实验过程中探索一种可靠的失神经支配皮肤模型制作方法。方法：将30只大鼠右侧T9-L1阶段脊神经根切断,制作失神经支配皮肤模型；然后在大鼠背部右侧失神经支配皮肤区域制作直径4 cm的深Ⅱ度烫伤创面,设为实验组,左侧对称正常皮肤制作同样的创面,设为对照组,伤后连续观察创面变化,于7,14,21 d采用随机数字表选取10只大鼠,麻醉后切取实验组和对照组伤区组织标本各10份,每一份标本分为两部分,一部分4%中性甲醛固定后,脱水包埋成蜡块,另一部分-80℃冰箱冷冻保存。石蜡包埋组织切片后采用改良三色染色法和免疫组织化学法观察Ⅰ和Ⅲ胶原分泌情况,血管内皮生长因子(VEGF)的变化,并计算Ⅰ/Ⅲ型胶原比例的变化,探讨创面愈合速度及愈合质量。-80℃冰箱冷冻保存的标本采用冰冻切片技术,利用蛋白基因产物9.5(PGP9.5)进行荧光免疫组织化学染色,其中一块5μm厚用普通荧光显微镜观察再生神经的平面结构及其数量变化,一块15 u m厚采用激光共聚焦显微镜观察神经三维结构。蛋白基因产物9.5(PGP9.5)是一种泛素水解酶,广泛应用于神经组织中表达的神经细胞分化的各个阶段,是一个已知的神经内分泌标志物,通过PGP9.5对神经染色,明确创面愈合过程中神经分布的变化。结果：(1)实验组Ⅱ,Ⅲ型胶原分泌和Ⅰ/Ⅲ型胶原比值于伤后各时间点均显著低于对照组(P<0.05)。实验组：I型胶原分泌在伤后7天、14天、21天逐渐增加(P<0.05),Ⅲ型胶原在伤后7天、14天无明显差异,至伤后21 d时分泌显著增高(P<0.05),Ⅰ/Ⅲ型胶原比值与伤后21 d时明显降低(P<0.05)；(2) VEGF变化：两组在伤后VEGF均开始升高,实验组升高缓慢,至伤后14天达到高峰,伤后21天维持在较高水平；对照组则迅速升高,伤后7天即达高峰,伤后14天开始缓慢下降,至伤后21变化相对稳定,维持在较高水平。伤后7天、14天两组VEGF表达两组间比较有显著差异(p<0.05),伤后21天两组间比较无显著差异(p>0.05)；(3)神经再生变化：伤后7天,实验组PGP 9.5阳性的信号较弱,对照组在伤区基底部可见PGP 9.5免疫阳性染色,两组NVF没有显著差异(p>0.05)；伤后14天,实验组切片仍未见免疫阳性染色区域,对照组PGP 9.5免疫阳性染色区域开始增多,主要分布在基底部和组织中部,一般为圆点、短棒状,对照组NVF显著高于实验组组(p<0.05)；伤后21天,对照组组PGP 9.5免疫阳性染色区域明显增多,呈圆点、短棒或者豆芽状,在组织各层都有PGP 9.5免疫阳性区域,对照组NVF显著高于实验组组(p<0.05),本实验中利用LSCM对神经进行三维重建,仅在对照组伤后21天取得理想效果,其余均由于免疫荧光强度较弱未能进行三维重建。结论：(1)伴随着创面愈合的过程周围受伤区域组织皮肤神经纤维也有一个再生的过程,脊神经根切断后的失神经支配皮肤未发现明显的神经再生；(2)创伤早期失神经支配可能使创面愈合延迟；(3)创面重塑期减轻神经支配可能会改善创面重塑质量。

全文目录

中文摘要  6-8
ABSTRACT  8-11
符号说明  11-12
前言  12-18
材料方法  18-26
结果  26-28
讨论  28-34
结论  34-35
附图  35-47
附表  47-49
参考文献  49-54
致谢  54-55
攻读硕士学位期间发表的论文  55-56
学位论文评阅及答辩情况表  56

脊神经根离断对大鼠烫伤创面愈合速度、愈合质量及神经再生的影响

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