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拮抗黄瓜枯萎病菌的木霉菌株筛选及主要生防机理研究

作　者: 熊敏
导　师: 高必达；陈捷
学　校: 湖南农业大学
专　业: 生物安全与检疫
关键词: 猥木霉黄瓜枯萎病生物防治细胞壁降解酶诱导抗性
分类号: S476
类　型: 硕士论文
年　份: 2011年
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内容摘要

本研究对采集自华东地区的166株木霉菌进行了拮抗黄瓜枯萎病的实验,从作为初筛的抑菌试验中获得了10株拮抗效果在60%以上的木霉菌,其中菌株FZ22抑菌率最高,可达79.04%,通过盆栽活体试验进行复筛,FZ22同样表现出对黄瓜枯萎病很好的防治作用,防效可达87.5%。经形态学及ITS分子鉴定FZ22为猥木霉(Trichoderma erinaceum Bissett)。对离体筛选拮抗黄瓜枯萎病的木霉菌的方法进行了改进,利用11个不同的木霉菌株分别比较了对峙培养法、病原菌存活率测定法、生防菌分泌物降解病原菌测定法、浸种抑菌萌发试验法及种苗接种活体筛选法对抑制黄瓜枯萎病菌(Fusarium oxysporum. f. sp.cucumerium)的拮抗木霉菌的筛选效率。试验表明不同的筛选方法获得拮抗木霉菌的菌株的结果差异较大,其中病原菌存活率测定法与活体接种筛选法结果一致性较高,可推荐作为生防木霉菌株初筛的有效方法。初步探讨了木霉FZ22的拮抗相关机制,在猥木霉与黄瓜枯萎病菌的抑菌试验中可看出,猥木霉生长速度明显快于病原菌,具有空间及营养竞争优势。而在显微观察中发现猥木霉能附着、缠绕在黄瓜枯萎病菌菌丝上,最终使病原菌丝断裂消解。在对猥木霉FZ22不同培养基中产生与抗病相关的细胞壁降解酶的活性变化研究中发现,有失活的黄瓜枯萎病菌存在的培养基比其他培养基中所检测到的几丁质酶和β-1,3-葡聚糖酶活性更高,几丁质酶活性96h到达最高峰,酶活性峰值为22.6U/mg。β-1,3-葡聚糖酶活性从72h开始一直呈现出上升趋势。以寄主植物黄瓜为研究对象,测定接种不同处理后在不同时间的防御酶系变化。先接种木霉FZ22再接种黄瓜枯萎病菌的处理,其苯丙氨酸解氨酶、超氧物歧化酶、过氧化物酶、多酚氧化酶酶活性均高于其他处理,且变化趋势基本相同,到第7天都达到酶活性高峰。从各防御酶活性的增长速度来看,都表现为第5天迅速上升到第7天达到峰值。同时,对寄主植物的电导率测定也直观的反映出事先接种拮抗木霉FZ22对防治黄瓜枯萎病的优势。

全文目录

摘要  4-5
Abstract  5-10
第一章文献综述  10-16
  1 黄瓜枯萎病的概述  10
  2 黄瓜枯萎病的防治现状  10-11
    2.1 传统防治措施  10-11
      2.1.1 农业防治  10
      2.1.2 化学防治  10-11
    2.2 生物防治现状  11
      2.2.1 真菌类  11
      2.2.2 细菌类  11
      2.2.3 链霉菌  11
  3 木霉菌研究的现状  11-16
    3.1 对植物病原真菌的拮抗机制  12-14
    3.2 防治植物病害的应用  14-16
第二章拮抗黄瓜枯萎病的木霉菌菌株的筛选及鉴定  16-21
  1 材料与方法  16-17
    1.1 材料  16
    1.2 试验方法  16-17
      1.2.1 拮抗作用测定  16
      1.2.2 盆栽防效试验  16-17
      1.2.3 高效拮抗木霉菌的种类鉴定  17
  2 结果与分析  17-20
    2.1 拮抗作用测定  17-19
    2.2 盆栽防效试验  19-20
    2.3 高效拮抗木霉菌的种类鉴定  20
  3 结论与讨论  20-21
第三章对黄瓜枯萎病有拮抗作用的木霉菌筛选方法评估  21-29
  1 材料与方法  21-23
    1.1 材料  21
    1.2 试验方法  21-23
      1.2.1 对峙培养  21-22
      1.2.2 尖孢镰刀菌存活率测定  22
      1.2.3 木霉菌分泌物降解病原菌菌丝  22
      1.2.4 木霉浸种抑菌萌发试验  22
      1.2.5 种苗活体接种筛选  22-23
    1.3 数据分析  23
  2 结果与分析  23-27
    2.1 对峙培养法  23-24
    2.2 病菌存活率测定法  24-25
    2.3 生防菌分泌物降解病原菌菌丝测定法  25-26
    2.4 木霉浸种抑菌萌发试验法  26
    2.5 种苗活体接种筛选法  26-27
    2.6 离体筛选与活体筛选方法比较分析  27
  3 讨论  27-29
第四章拮抗木霉FZ22对黄瓜枯萎病的拮抗机制研究  29-34
  1 材料与方法  29-31
    1.1 材料  29
    1.2 试验方法  29-31
      1.2.1 重寄生作用的显微观察  29
      1.2.2 细胞壁降解酶活性测定  29-31
        1.2.1.1 几丁质酶活性测定  30
        1.2.1.2 β-1,3葡聚糖酶活性测定  30-31
  2 结果与分析  31-32
    2.1 重寄生作用的显微观察  31
    2.2 细胞壁降解酶活性测定  31-32
  3 结论与讨论  32-34
第五章拮抗木霉FZ22诱导黄瓜抗枯萎病相关防御反应酶系变化  34-41
  1 材料与方法  34-36
    1.1 材料  34
    1.2 试验方法  34-36
      1.2.1 接种和取样  34-35
      1.2.2 粗酶液的制备  35
      1.2.3 超氧化物歧化酶(SOD)活性测定  35
      1.2.4 过氧化物酶(POD)活性测定  35
      1.2.5 苯丙氨酸解氨酶(PAL)活性测定  35-36
      1.2.6 多酚氧化酶(PPO)活性测定  36
      1.2.7 根部电导率测定  36
  2 结果与分析  36-39
    2.1 超氧化物歧化酶(SOD)活性测定  36-37
    2.2 过氧化物酶(POD)活性测定  37
    2.3 苯丙氨酸解氨酶(PAL)活性测定  37-38
    2.4 多酚氧化酶(PPO)活性测定  38-39
    2.5 根部电导率测定  39
  3 结论与讨论  39-41
第六章结论与展望  41-43
  1 结论  41-42
  2 展望  42-43
参考文献  43-50
致谢  50-51
发表论文及参加课题  51

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