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灰黄霉素对人小细胞肺癌NCI-H446细胞的体内外作用及机制探讨

作　者: 施舜缤
导　师: 沈振亚
学　校: 苏州大学
专　业: 胸心血管外科学
关键词: 灰黄霉素凋亡 NCI-H446细胞体内成瘤
分类号: R285.5
类　型: 博士论文
年　份: 2011年
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内容摘要

目的:观察灰黄霉素在体内外对人小细胞肺癌细胞株NCI-H446抗肿瘤作用。方法:①以不同浓度的灰黄霉素作用于NCI-H446细胞48小时,CCK-8法测定细胞的存活率;采用倒置显微镜、荧光显微镜、透射电镜观察细胞形态及超微结构的变化;采用流式细胞仪检测NCI-H446细胞周期的变化;AnnexinⅤ-FITC/PI双标记检测NCI-H446细胞的凋亡;比色法检测Caspase-3, Caspase-9活性变化;Western blotting检测Bax,Bcl-2,Caspase-3和细胞色素C的表达。②通过划痕实验、transwell小室及matrigel胶体外检测药物对NCI-H446细胞迁移、侵袭及粘附的影响。③用灰黄霉素在NCI-H446肺癌细胞荷瘤裸鼠的瘤体内进行注射治疗,观察肿瘤生长变化,两周后处死裸鼠,摘除瘤体称重量,通过免疫组化法检测Bcl-2、Bax、Caspase-3、p53和VEGF等细胞因子的表达。结果:①灰黄霉素能显著抑制NCI-H446细胞的增殖,半数抑制率浓度为24.58±1.32μM;显微镜下可见有典型的细胞凋亡特征性形态学改变。G2/M期细胞数增多,S期和G0/G1期细胞数减少,同时伴有亚二倍体凋亡峰出现。灰黄霉素可活化NCI-H446细胞的caspase-3、caspase-9并上调Bax和细胞浆中细胞色素C的表达,下调Bcl-2的表达。②灰黄霉素可明显抑制NCI-H446细胞与matrigel的粘附及其对人工基底膜的侵袭力和迁移力,且抑制作用随剂量的升高而增强,划痕实验结果也显示灰黄霉素处理组细胞与对照组细胞相比迁移能力降低。③灰黄霉素瘤内注射小细胞肺癌细胞株NCI-H446裸鼠移植瘤后能显著抑制肿瘤生长,免疫组化结果显示灰黄霉素能明显上调细胞因子Bax、p53和Caspase-3的表达和下调Bcl-2与VEGF的表达。结论:灰黄霉素能抑制肺癌NCI-H446细胞的生长,诱导NCI-H446细胞凋亡;灰黄霉素具有抑制NCI-H446细胞粘附、侵袭与转移的作用;灰黄霉素能抑制NCI-H446细胞的体内致瘤能力。

全文目录

中文摘要  4-6
Abstract  6-9
引言  9-13
  参考文献  11-13
第一部分灰黄霉素对人小细胞肺癌细胞株NCI-H446体外生长抑制及凋亡机制的研究  13-38
  1 材料和方法  13-17
  2 结果  17-35
  3 讨论  35-38
第二部分灰黄霉素体外对人小细胞肺癌细胞NCI-H446 侵袭转移的影响  38-50
  1 材料和方法  38-40
  2 结果  40-48
  3 讨论  48-50
第三部分灰黄霉素对人小细胞肺癌NCI-H446 细胞抑癌效应的体内实验研究  50-59
  1 材料和方法  50-52
  2 结果  52-57
  3 讨论  57-59
结论  59-60
参考文献  60-64
综述：肺癌相关肿瘤标志物的研究进展  64-73
  参考文献  70-73
中英文缩略词表  73-74
攻读学位期间公开发表的论文  74-75
致谢  75-76

灰黄霉素对人小细胞肺癌NCI-H446细胞的体内外作用及机制探讨

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