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大鼠肠道生物屏障对卵清蛋白致敏效应的影响

作　者: 李娜
导　师: 胡东生；刘志刚
学　校: 郑州大学
专　业: 流行病与卫生统计学
关键词: BN大鼠肠道菌群双歧杆菌卵清蛋白致敏
分类号: R371
类　型: 硕士论文
年　份: 2011年
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内容摘要

目的：1.探讨肠道菌群对卵清蛋白致敏效应的影响。2.研究肠道菌群紊乱与食物过敏发生的先后顺序。3.研究双歧杆菌对食物过敏的预防和治疗作用。方法：构建棕色挪威大鼠(Brown-Norway Rat, BNRat)卵清蛋白(ovalbumin, OVA)致敏动物模型,以卵清蛋白lmg每天连续灌胃6周,同时分别建立PBS对照组,卡那霉素破坏肠道菌群组,双歧杆菌预防组和双歧杆菌治疗组；每周剪尾尖取血动态检测血清中OVA特异性IgE水平和IgG水平,以IgE水平高于对照组X+3S为致敏判断标准；同时每周用代谢笼无菌操作收集大鼠粪便,检测粪便菌落总数,及采用相对荧光定量PCR方法分别检测双歧杆菌、乳酸杆菌、大肠埃希菌、金黄色葡萄球菌的mRNA表达水平；6周后处死大鼠取回肠下段组织,分别通过光镜、电镜、免疫组化方法观察各组肠粘膜完整情况、炎症反应情况,及CD4+T细胞和CD8+T细胞数量变化。结果：1.致敏情况：OVA组和卡那霉素组各有4只大鼠致敏,致敏率为57%；双歧杆菌预防组和双歧杆菌治疗组各有1只大鼠致敏,致敏率为14%。2.OVA特异性IgG抗体检测：重复测量资料的方差分析结果显示,处理因素和时间之间存在交互作用。第二周PBS组、双歧杆菌预防组的OVA特异性IgG水平分别同OVA组间均存在统计学差异,P<0.05。第四周PBS组、双歧杆菌预防组的OVA特异性IgG水平分别与OVA组间差异有统计学意义,P<0.05；卡那霉素组分别和OVA组、双歧杆菌治疗组间差异有统计学意义,P<0.05。第六周PBS组、双歧杆菌预防组的OVA特异性IgG水平分别同OVA组间差异有统计学意义,P<0.05；卡那霉素组和双歧杆菌治疗组间差异有统计学意义,P<0.05。3.CD4+T细胞和CD8+T细胞免疫组化结果：OVA组、卡那霉素组、双歧杆菌预防组和治疗组的CD4+T细胞和CD8+T细胞数量均较PBS组少,其中,双歧杆菌预防组和治疗组CD4+T细胞和CD8+T细胞数量较OVA组和卡那霉素组增多。4.粪便菌落总数检测结果：重复测量资料的方差分析结果显示,处理因素和时间之间存在交互作用。第一周PBS组、OVA组分别同卡那霉素组间存在统计学差异,P<0.05; OVA组同双歧杆菌预防组间差异有统计学意义,P<0.05。第二周PBS组同其余四组间均存在统计学差异,P<0.05。第三周各组间均无统计学差异。第四周PBS组和OVA组分别于卡那霉素组间差异有统计学意义,P<0.05。第五周PBS组同双歧杆菌预防组间差异有统计学意义,P<0.05。第六周双歧杆菌预防组分别同PBS组、OVA组间差异有统计学意义,P<0.05。5.双歧杆菌、乳酸杆菌、大肠埃希菌、金黄色葡萄球菌的相对荧光定量PCR结果：双歧杆菌能够抑制肠道中大肠埃希菌、金黄色葡萄球菌等致病菌的mRNA表达水平,提高双歧杆菌、乳酸杆菌等益生菌的mRNA表达水平,OVA对肠道菌群的表达能够产生一定影响。6.各组回肠下段HE染色光镜结果：PBS组、双歧杆菌预防组肠道绒毛完整,未见粘膜上皮细胞损伤；治疗组偶可见粘膜上皮细胞损伤,绒毛水肿；OVA组和卡那霉素组小肠绒毛大部分剥脱,绒毛上皮细胞出现局灶性坏死,粘膜绒毛水肿、溃疡。7.PBS组、OVA组和双歧杆菌预防组回肠下段电镜结果：PBS组和双歧杆菌预防组肠绒毛整齐完整,OVA组肠绒毛有缺损剥脱现象；PBS组肠粘膜紧密连接结构严密, OVA组可见紧密连接明显扩大,双歧杆菌预防组紧密连接结构较PBS组松散。结论：1.食物过敏发生前,肠道菌群紊乱已经存在。2.双歧杆菌具有预防和治疗食物过敏的作用。3.OVA能够导致小肠粘膜CD4+T细胞和CD8+T细胞数量减少,能够对肠道菌群产生一定影响。

全文目录

摘要  4-6
Abstract  6-13
引言  13-15
1 材料与方法  15-22
  1.1 材料  15-17
  1.2 方法  17-22
2 结果  22-50
  2.1 免疫学指标及其检测结果  22-31
  2.2 肠道菌群相关指标及检测结果  31-44
  2.3 肠道组织形态学观察  44-50
3 讨论  50-55
4 结论  55-56
参考文献  56-60
综述  60-74
  参考文献  69-74
个人简历、在学期间发表的学术论文与研究成果  74-75
致谢  75

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